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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » RACE扩增基因全长
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ymzfeng

金虫 (小有名气)

[交流] RACE扩增基因全长

各位大侠有没有做过RACE的，最近做RACE老是扩不出来，每次都会跑出在700bp的一条抹状带，不知各位有遇到此类情况吗？
谢谢！

电泳图（Marker为DL2000，最亮的为750bp）
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1楼 2011-11-04 17:01:19
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heroyl

木虫 (正式写手)
★
ymzfeng(金币+1):谢谢参与
具体一点好吗？你做的是3-RACE还是5-RACE。
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ymzfeng
2楼2011-11-04 19:06:02
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ymzfeng

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by heroyl at 2011-11-04 19:06:02:
具体一点好吗？你做的是3-RACE还是5-RACE。

都在做，都跑出了这样的情况
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4楼2011-11-05 10:20:04
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倾听世界0721

金虫 (小有名气)
★
ymzfeng(金币+1):谢谢参与
你扩的是什么基因，用的是什么酶？
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5楼2011-11-05 21:25:45
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
★
ymzfeng(金币+1):谢谢参与
最近也在做5端，总是获得拖尾的亮斑，有什么解决办法呀
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6楼2011-11-06 18:57:03
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jasco

木虫 (正式写手)
★
ymzfeng(金币+1):谢谢参与
非特异性扩增产物，多设计两条引物试试
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7楼2011-11-06 20:20:21
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ymzfeng

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 倾听世界0721 at 2011-11-05 21:25:45:
你扩的是什么基因，用的是什么酶？

扩增的是一个目的基因，重叠区大小1000bp，用的酶是advantage2
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8楼2011-11-07 09:04:26
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倾听世界0721

金虫 (小有名气)
你的反转录产物进行检测了吗？如果反转录产物没问题，那问题应该出现在扩增上。
不知你用的反应条件是怎样的，我前两个月做RACE是两轮PCR，第二轮的模板是第一轮的产物。
呵呵，你再看看酶的说明书，看体系是否正确。另外，可以根据引物的情况适当提调整一下退火温度。
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ymzfeng
9楼2011-11-07 15:57:35
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ymzfeng

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by 倾听世界0721 at 2011-11-07 15:57:35:
你的反转录产物进行检测了吗？如果反转录产物没问题，那问题应该出现在扩增上。
不知你用的反应条件是怎样的，我前两个月做RACE是两轮PCR，第二轮的模板是第一轮的产物。
呵呵，你再看看酶的说明书，看体系是否 ...

谢谢你
我再试试
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10楼2011-11-08 10:49:59
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倾听世界0721

金虫 (小有名气)
加油哦！
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11楼2011-11-08 11:25:35
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yld06103023楼
2011-11-05 08:53   回复  
ymzfeng(金币+1):谢谢参与
linyingjia(金币-1): 不要回复 没有用的答案 2011-11-05 09:01:41
linyingjia:编辑内容 2011-11-05 09:01
[ Last edited by linyingjia on 2011-11-5 at 09:01 ]
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