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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RT-PCR引物稀释问题，欢迎战友们进来指导！急盼中
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2011加油

银虫 (正式写手)

[交流] RT-PCR引物稀释问题，欢迎战友们进来指导！急盼中

大家好，我的引物是交给英骏公司合成，之前没进行过引物稀释，大家帮忙看看我将这样配制是否正确，我需要的引物终浓度为10umol/L。以其中一管引物为例：nmols per OD=4.4，每管为1OD，离心后，先加入10ul DEPC水稀释成100umol/L母液，混匀，再取出100ul母液加入900ulDEPC水，混匀，即得10umol/L溶液。

另外，稀释的溶液说法不一，有用灭菌后的超纯水、TE溶液、DEPC水，是不是进行RT-PCR实验，采用DEPC水更好一些？？

最后，英骏公司的DNA合成说明书背面，我有一些看不明白，给出这个信息
Scale of Synthesis:100nmole想说明的是什么哦？？
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1楼 2012-11-01 19:48:36
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mutou1025

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
2011加油: 金币+1, 哈哈，引物终浓度是多少哦？ 2012-11-02 17:37:26
做RT 引物浓度不能太高，要不溶解曲线上就会看到二聚体的曲线了。我做20ul 引物一般加0.6ul
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14楼2012-11-02 15:14:24
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2011加油

银虫 (正式写手)
有点错误了，需要更正一下，第一步先加44ul DEPC水，形成母液100umol/L。
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2楼2012-11-01 19:50:25
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2011加油

银虫 (正式写手)
再去10ul母液加入90ul DEPC水，混匀，即得。
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3楼2012-11-01 19:54:29
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
2011加油: 金币+2, 是的，谢谢交流，是按照后面更正的来计算不？盼回复 2012-11-01 21:42:44
2011加油: 回帖置顶 2012-11-02 14:40:07
是开始加44ul depc水形成母液的吧
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4楼2012-11-01 20:22:15
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