| 查看: 2561 | 回复: 11 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
笨笨和傻猪银虫 (小有名气)
|
[求助]
为什么电转后筛菌，然后用通用引物PCR，但是空GS115都PCR不出条带？跪求！回复！！已有5人参与
|
|
|
我是电转整合型载体PpiczaA到毕赤酵母GS115中的，但是电转化完成后，进行筛菌。然后想通过菌落PCR先筛选一部分，以下是我的PCR方法及条件： 1）我采用的用未做电转的空菌GS115做对照，挑取平板上的菌用宝生物的lysis buffer（code ：9760）裂解的，然后取1ul进行的PCR,用的是宝生物的Taq酶，50ul体系 2)体系为：taq（5u/ml）： 0.25ul PCR条件：94℃ 10min 10×PCR buffer： 5ul 94℃ 30s dNTPs（各2.5mM）：4ul 54℃ 30s 模板为： 1ul 72℃ 3min40s 3AOX（10uM）： 1ul 72℃ 7min 5AOX(10UM）： 1ul 30个循环 灭菌水： 47.5ul 跪求各位原因啊，哎，什么条带也不出，我尝试了好几次裂解方式，仍旧如此 |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有157人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
菌液PCR引物问题
已经有9人回复- 菌液pcr,坐等求助
已经有20人回复
- PCR阴性对照出条带，但是内参没有，换了一管新的引物还是有条带
已经有18人回复
- 引物浓度不一致会导致PCR无扩增带么？
已经有7人回复
- 请问一下要是一对引物做普通PCR的目的条带都很淡
已经有18人回复
- 用pMD 19-T做克隆之后用哪对通用引物做菌落PCR以及测序呢？
已经有7人回复
- 菌落PCR使用的通用引物序列是什么？
已经有9人回复
- 拟南芥突变体鉴定通用引物（LB+RP）总是跑不出条带
已经有17人回复
- 细菌DGGE-PCR，用的V3区引物 总是两条带
已经有4人回复
- 用简并引物跑PCR跑不出条带，愁死了
已经有24人回复
- 求助：菌落PCR条带弱且拖尾是怎么回事啊？
已经有18人回复
- 急！PCR产物测序找不到引物
已经有17人回复
- 质粒PCR用来验证阳性的可靠性
已经有18人回复
- 转化后菌液PCR鉴定，没有目的条带
已经有15人回复
- 求大虫帮忙看看通用引物PCR跑胶结果
已经有11人回复
- 土壤DNA提取，真菌通用引物PCR，琼脂糖电泳图，感觉有问题，新手求助
已经有7人回复
- 用PCR扩增后的DNA如何测序？不能直接用PCR就知道是什么菌种之类的吧？
已经有6人回复
- 高氏一号分离的菌用16S通用引物扩增不出条带
已经有9人回复
- 菌液PCR是阳性，却提不出来阳性质粒！求助
已经有31人回复
- 两种引物的PCR电泳图，做了多次还是不解
已经有18人回复
- 兼并引物PCR连T载体后，怎么鉴定有没有连上
已经有20人回复
- 【求助/交流】细菌16SDNA的通用引物
已经有12人回复
- 【求助/交流】菌落PCR扩出来的片段不是目的片段，咋办啊？？？？
已经有9人回复
- 【求助/交流】关于毕赤酵母电转后PCR验证问题
已经有20人回复
笨笨和傻猪
银虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 1083.5
- 散金: 1
- 红花: 4
- 帖子: 130
- 在线: 54.8小时
- 虫号: 1362225
- 注册: 2011-08-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
3楼2014-11-14 08:46:20
zhaodahe
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 220 (大学生)
- 金币: 1796.6
- 红花: 7
- 帖子: 461
- 在线: 378.5小时
- 虫号: 552612
- 注册: 2008-04-30
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传学
2楼2014-11-13 19:25:01
4楼2014-11-16 16:38:23
zergbloody
铁虫 (正式写手)
- 应助: 35 (小学生)
- 金币: 1260.6
- 红花: 2
- 帖子: 682
- 在线: 155小时
- 虫号: 1355427
- 注册: 2011-07-25
- 专业: 水产生物免疫学与病害控制
5楼2014-11-16 19:18:50