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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 拟南芥突变体鉴定通用引物（LB+RP）总是跑不出条带
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科技广场

铜虫 (小有名气)

[求助] 拟南芥突变体鉴定通用引物（LB+RP）总是跑不出条带 已有3人参与

拟南芥突变体鉴定通用引物（LB+RP）总是跑不出条带，能够排除是野生型，但LB+RP跑不出条带，不敢确定是突变体，求高手指教，谢谢
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1楼 2013-09-08 14:33:00
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匿名

用户注销 (初入文坛)
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12楼2014-12-04 11:00:25
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-04 00:50:24
楼主都能排除野生型了, 那么我假定楼主已经能从LP+RP组合得到肯定结果了, 现在的问题是LB+RP的PCR出不来.
换一个RP引物序列试试, 可能是你的LB+RP组合起来PCR难做.
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2楼2013-09-08 23:30:30
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挽风北篱

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-04 00:50:31
有可能是插入方向和你查到的相反，用另外一端的引物试一下。也可能插入的位置和想象的不一样，也可能插入了多个，也可能是温度设置有问题（这种情况可以适当把anealing的温度降低2-3度先试一下）
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4楼2013-10-02 23:23:14
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科技广场

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-09-08 23:30:30
楼主都能排除野生型了, 那么我假定楼主已经能从LP+RP组合得到肯定结果了, 现在的问题是LB+RP的PCR出不来.
换一个RP引物序列试试, 可能是你的LB+RP组合起来PCR难做.

RP确定没问题，用野生型的跑过了，通用引物三种都试了，都没有结果，不知道是哪的问题？

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3楼2013-09-08 23:58:36
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科技广场

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 挽风北篱 at 2013-10-02 23:23:14
有可能是插入方向和你查到的相反，用另外一端的引物试一下。也可能插入的位置和想象的不一样，也可能插入了多个，也可能是温度设置有问题（这种情况可以适当把anealing的温度降低2-3度先试一下）

退火温度降了两度试了也不行

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5楼2013-10-02 23:26:57
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科技广场

铜虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by 科技广场 at 2013-10-02 23:26:57
退火温度降了两度试了也不行
...

插入的位置和想象的不一样，插入了多个，是什么意思，您能不能详细解释下，谢谢了

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6楼2013-10-02 23:28:41
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科技广场

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 挽风北篱 at 2013-10-02 23:23:14
有可能是插入方向和你查到的相反，用另外一端的引物试一下。也可能插入的位置和想象的不一样，也可能插入了多个，也可能是温度设置有问题（这种情况可以适当把anealing的温度降低2-3度先试一下）

插入的位置和想象的不一样，插入了多 个，是什么意思，您能不能详细解释下， 谢谢了

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7楼2013-10-02 23:29:46
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挽风北篱

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 科技广场 at 2013-10-02 23:26:57
退火温度降了两度试了也不行
...

你的突变体用的都是salk的么？另外RP BP都是你自行设计的还是直接从网站copy的，有没有tm的相关信息？
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8楼2013-10-02 23:31:05
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科技广场

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 挽风北篱 at 2013-10-02 23:31:05
你的突变体用的都是salk的么？另外RP BP都是你自行设计的还是直接从网站copy的，有没有tm的相关信息？...

是cs号的，引物直接从网上copy的

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9楼2013-10-03 08:52:57
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576022562

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 科技广场 at 2013-10-03 08:52:57
是cs号的，引物直接从网上copy的
...

你好，那个CS号的，你是从哪个网站上设计的引物呀？能否告诉我一下
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10楼2014-01-13 20:00:45
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