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绝尘51

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因敲除后，鉴定突变体引物如何设计

我想用Red系统敲除大肠杆菌中的一段序列，敲除后，如何鉴定突变体，使用根据被敲除序列设计的吗？如果用突变体基因组进行pcr时，没有目标产物出现，就是阳性，证明基因被敲除了吗？望各位大师帮帮忙
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1楼 2012-10-11 09:41:15
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hippo_li

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流问题 2012-10-11 15:59:09
绝尘51: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-10-14 15:33:22
在敲除序列两端设计引物，敲除前和敲除后pcr扩增的片段大小应该会不一样，比较一下就知道敲除了没有。最好不要用扩增不出来作为阳性，因为pcr扩增不出来可能与其他因素有关。
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2楼2012-10-11 10:30:35
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l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
绝尘51: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-10-14 15:33:30
不行，用目标基因两侧序列和标签内部两侧序列，设计引物，可以同时p出两个序列可以确定为阳性，如需进一步验证需测序。
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相信自己
3楼2012-10-11 10:32:39
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绝尘51

新虫 (初入文坛)
标签内部两侧序列？是根据抗性基因本身设定的吗
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4楼2012-10-14 15:31:28
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nlh1985428

新虫 (初入文坛)
在一篇文献中看到 E. coli strain SH1200(glpT phoR ugpA704::Tn10)，请问各位大师括号中的注释是什么意思？
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5楼2013-02-21 15:40:16
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