应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 拟南芥突变体鉴定通用引物（LB+RP）总是跑不出条带
51/1返回列表
查看: 4288  |  回复: 17
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

科技广场

铜虫 (小有名气)

[求助] 拟南芥突变体鉴定通用引物（LB+RP）总是跑不出条带已有3人参与

拟南芥突变体鉴定通用引物（LB+RP）总是跑不出条带，能够排除是野生型，但LB+RP跑不出条带，不敢确定是突变体，求高手指教，谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2013-09-08 14:33:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

挽风北篱

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 科技广场 at 2013-10-02 23:26:57
退火温度降了两度试了也不行
...

你的突变体用的都是salk的么？另外RP BP都是你自行设计的还是直接从网站copy的，有没有tm的相关信息？
赞一下 回复此楼
8楼2013-10-02 23:31:05
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-04 00:50:24
楼主都能排除野生型了, 那么我假定楼主已经能从LP+RP组合得到肯定结果了, 现在的问题是LB+RP的PCR出不来.
换一个RP引物序列试试, 可能是你的LB+RP组合起来PCR难做.
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-09-08 23:30:30
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

科技广场

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-09-08 23:30:30
楼主都能排除野生型了, 那么我假定楼主已经能从LP+RP组合得到肯定结果了, 现在的问题是LB+RP的PCR出不来.
换一个RP引物序列试试, 可能是你的LB+RP组合起来PCR难做.

RP确定没问题，用野生型的跑过了，通用引物三种都试了，都没有结果，不知道是哪的问题？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
3楼2013-09-08 23:58:36
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

挽风北篱

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-04 00:50:31
有可能是插入方向和你查到的相反，用另外一端的引物试一下。也可能插入的位置和想象的不一样，也可能插入了多个，也可能是温度设置有问题（这种情况可以适当把anealing的温度降低2-3度先试一下）
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2013-10-02 23:23:14
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭