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Lotus617

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助:质粒酶切问题,质粒被切飞了啊!!已有10人参与

为什么我的AgeI酶切pLKO,1质粒载体每次切出来都是这个样子啊,求大侠们指点指点,严重影响实验进展了啊

  A=AgeI  E=EcoRI  AE=AgeI/EcoRI  78=pLKO.1质粒。菜鸟新手上路,求高手们赐教啊!


还有第三张是我用试剂盒提的质粒,0.8%跑胶成这个样子。不知提的纯不纯啊?、?

要shi的赶脚都有了!切了一个月了!

求助:质粒酶切问题,质粒被切飞了啊!!
酶切1.jpg


求助:质粒酶切问题,质粒被切飞了啊!!-1
酶切2.jpg


求助:质粒酶切问题,质粒被切飞了啊!!-2
试剂盒提取的质粒


求助:质粒酶切问题,质粒被切飞了啊!!-3
载体酶切20140409 上午.jpg


求助:质粒酶切问题,质粒被切飞了啊!!-4
第三次提取质粒酶切  1  2014-04-23 13hr 41min.jpg
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Lotus617

新虫 (初入文坛)

今天用NEB重新给我寄的AgeI酶来切我的质粒,终于见好了!果然是酶的问题!崩溃
23楼2014-05-25 21:04:43
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普通回帖

HYZ221314

至尊木虫 (职业作家)

优秀版主

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-05-12 09:31:17
不纯是肯定的了,换换试剂盒吧,要不自己配制

[ 发自小木虫客户端 ]
青山不断,绿水长流
2楼2014-05-12 06:44:11
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快乐农夫

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2014-05-25 23:03:29
切的时间太长了,切碎了
3楼2014-05-12 10:10:26
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Lotus617

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by HYZ221314 at 2014-05-12 06:44:11
不纯是肯定的了,换换试剂盒吧,要不自己配制

谢谢你的回复,我用的天根的质粒小提中量试剂盒,唉!怎么那么多条带?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2014-05-12 11:14:35
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Lotus617

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 快乐农夫 at 2014-05-12 10:10:26
切的时间太长了,切碎了

我切啦各种时间点的,都是这样!10~20~30~40~60~120Min。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2014-05-12 11:15:53
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HYZ221314

至尊木虫 (职业作家)

优秀版主

引用回帖:
4楼: Originally posted by Lotus617 at 2014-05-12 11:14:35
谢谢你的回复,我用的天根的质粒小提中量试剂盒,唉!怎么那么多条带?
...

二楼也对,切时间太长了?做不出来什么都有可能

[ 发自小木虫客户端 ]
青山不断,绿水长流
6楼2014-05-12 11:16:21
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
提的不好,条带太多了。
7楼2014-05-12 12:36:21
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流! 2014-05-12 15:21:32
LZ用的内切酶是快切酶还是普通酶啊,快切酶10分钟就切好了,如果切5分钟就能把质粒切碎那酶就不能用,换其他公司的吧,有些内切酶要添加BSA,你看看说明书上有没有说明,从图上看第二张图的78E好像切的还可以。
大家相互帮助哈
8楼2014-05-12 14:28:12
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快乐农夫

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-05-12 22:58:22
很显然,既然你切10分钟都是这个样子,那么你的质粒本身存在严重的降解,就是说没有用酶切,自己就碎了,如果是老质粒,说明降解严重,如果是新提的,说明压根就没提出来
9楼2014-05-12 17:55:18
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Lotus617

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by HYZ221314 at 2014-05-12 06:44:11
不纯是肯定的了,换换试剂盒吧,要不自己配制

今天我又把之前提的质粒拿来跑了一次,1%gel.有人说还可以,我也不确定到底可用不可用!请你们帮我看看!
求助:质粒酶切问题,质粒被切飞了啊!!-5
未酶切质粒A 1  2014-05-12 11hr 56min_2345看图王.jpg


求助:质粒酶切问题,质粒被切飞了啊!!-6
未酶切质粒B 1  2014-05-12 11hr 56min_2345看图王.jpg


求助:质粒酶切问题,质粒被切飞了啊!!-7
78凝胶回收A 3 2014-05-12 15hr 58min.jpg

10楼2014-05-12 21:55:13
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