应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 求助：质粒酶切问题，质粒被切飞了啊！！
252/3返回列表上一页123下一页
查看: 2950  |  回复: 24
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Lotus617

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-05-12 14:28:12
LZ用的内切酶是快切酶还是普通酶啊，快切酶10分钟就切好了，如果切5分钟就能把质粒切碎那酶就不能用，换其他公司的吧，有些内切酶要添加BSA，你看看说明书上有没有说明，从图上看第二张图的78E好像切的还可以。

用的neb的酶，自带有buffer1.1，不用加BSA。
另外我买了buffer1需加BSA，酶切结果一样。都碎了
赞一下 回复此楼
11楼2014-05-12 21:57:09
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lotus617

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 红卫大兵 at 2014-05-12 12:36:21
提的不好，条带太多了。

12楼2014-05-12 21:58:12
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by Lotus617 at 2014-05-12 21:55:13
今天我又把之前提的质粒拿来跑了一次，1%gel.有人说还可以，我也不确定到底可用不可用!请你们帮我看看！

未酶切质粒A 1  2014-05-12 11hr 56min_2345看图王.jpg

未酶切质粒B 1  2014-05-12 11hr 56min_2345看图王 ...

这次的质粒没有问题，可以切一次看看
赞一下 回复此楼
大家相互帮助哈
13楼2014-05-12 22:26:25
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-12 22:58:36
引用回帖:
11楼: Originally posted by Lotus617 at 2014-05-12 21:57:09
用的neb的酶，自带有buffer1.1，不用加BSA。
另外我买了buffer1需加BSA，酶切结果一样。都碎了...

NEB的酶我用过，完全没有问题，除非分销商做了手脚
LZ可以37度用buffer1.1切割2个小时看看，如果还是碎就25度buffer1.1切割12个小时，我以前用过的NEB的pmeI  25度切16个小时，效果很好，不用担心star活性。
赞一下 回复此楼
大家相互帮助哈
14楼2014-05-12 22:31:08
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖仅楼主可见
赞一下
15楼2014-05-12 23:22:37
 已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

meng_xu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Lotus617(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-14 09:04:15
天跟提质粒的，还可以，我用过，效率和纯度都可以满足酶切克隆什么都，没有问题。

看你图片，质粒提取也没什么问题。可能你的酶有问题吧，或者是你单酶切用78A体系有问题，温度什么的，都好好看看，双酶切看起来不也酶什么问题么？
赞一下 回复此楼
16楼2014-05-13 02:18:27
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seayon

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Lotus617(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-14 09:04:28
质粒提得挺好的 也没看到有降解 且EcoRI单酶切切得也还好 问题就只在AgeI这个酶上
估计酶被污染了 导致导致质粒降解
买一管新的酶试试看喽
赞一下 回复此楼
如果没有糟糕的时刻，生命是多么无趣。每一天，每件小事，都是锻炼行动力的好机会
17楼2014-05-13 04:42:32
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lotus617

新虫 (初入文坛)
谢谢各位的建议，各种可能的原因我都考虑进来做过，都还是切碎了，综合看来就是酶的问题啦！唉😔，可恶的经销商～～～！！！非常感谢大家！🌹🌹🌹🌹💝💝💝💝💝🍺🍺🍺🍺🍺🍺☕☕☕☕☕👑👑👑👑👑👑💰🏆🏆🏆🏆🏆🏆

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
18楼2014-05-13 08:41:04
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangjingjing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Lotus617(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-14 09:04:48
我也遇到过这情况，我是用分子克隆书上SDS大提的质粒，跑出条带好的话，酶切多久都没问题的，不然你试下？祝你好运！
赞一下 回复此楼
努力打败一切
19楼2014-05-14 00:54:42
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hakkie
引用回帖:
2楼: Originally posted by HYZ221314 at 2014-05-12 06:44:11
不纯是肯定的了，换换试剂盒吧，要不自己配制

20楼2014-05-14 08:49:23
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Lotus617 的主题更新
252/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭