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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pGEM-T质粒酶切时遇到的一些问题
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奔跑的乌拉龟

铜虫 (正式写手)

[交流] pGEM-T质粒酶切时遇到的一些问题

分子生物学实验课做DNA的酶切连接，用的是EcoRⅠ和SpeⅠ酶酶切，按道理来说应该得到约3000bp和638bp的条带，可是电泳跑出来除了这两条带外还得到一条约2000bp的条带，很好奇，不知道是怎么回事，和大家交流一下，marker大小为5000bp.marker右边两条电泳带就是GST质粒酶切电泳图。

2012.09.25 实验课 4-6大组.jpg
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1楼 2012-09-26 21:39:34
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回帖置顶 ( 共有1个 )

奔跑的乌拉龟

铜虫 (正式写手)
奔跑的乌拉龟: 回帖置顶 2012-09-26 22:35:29
这个图可能更清楚点

J$2Y2(3L$SNT9WD@VBIHE@6.jpg
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2楼2012-09-26 21:46:02
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普通回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)
我做双酶切也常出现这种诡异的情况~
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3楼2012-09-27 09:23:57
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Frank王

铜虫 (初入文坛)
★
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没看明白你那图？2000带没找到。好像638带也没有啊。
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4楼2012-09-27 10:25:29
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奔跑的乌拉龟

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Frank王 at 2012-09-27 10:25:29
没看明白你那图？2000带没找到。好像638带也没有啊。

仔细看最亮的条带下面有两条很暗的条带，可能是点样少了拍出来看不清楚，但在电脑上是能看见的
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5楼2012-09-27 11:26:42
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奔跑的乌拉龟

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sxxuan at 2012-09-27 09:23:57
我做双酶切也常出现这种诡异的情况~

是吧~你问过老师没
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6楼2012-09-27 11:27:31
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sxxuan

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
改体系，增加质粒浓度，加大酶量减少酶切时间。只要我要的条带能出来，就不管多出来的条带了
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7楼2012-09-27 13:23:22
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也看不清楚小带。不过我想2000的可能是没切开的质粒。调整酶切体系。
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8楼2012-09-27 13:33:25
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susizheng

木虫 (著名写手)
★ ★
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奔跑的乌拉龟: 金币+1 2012-10-08 20:12:46
少量未切干净的质粒
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9楼2012-09-28 09:34:29
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song333

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
奔跑的乌拉龟: 金币+1 2012-10-08 20:12:52
2000 bp band is un-cut plasmid.
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10楼2012-09-28 11:09:07
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tangel521

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
11楼2012-10-07 12:59:20
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奔跑的乌拉龟

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by tangel521 at 2012-10-07 12:59:20
降低质粒浓度，加大酶切反应体系，

可能是星号活性
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12楼2012-10-14 22:32:35
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