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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒双酶切遇到点问题，求指教。
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湖畔狂想

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒双酶切遇到点问题，求指教。 已有7人参与

今天刚做完的酶切
10μL体系：buffer 2μL、酶各0.5μL、质粒2μL、水5μL。
我切了5个小时。

第1、3泳道只有浅浅的带，大小正确，但是为什么会这么浅，难道是切的时间短？
还是有其他问题，求指教！
非常感谢
质粒双酶切遇到点问题，求指教。
atpG1-3,Rab18,1,2.2013.12.18.JPG
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1楼 2013-12-18 20:54:45
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shengsong

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-18 23:32:09
质粒的浓度是多少？当你的体系中质粒浓度过高时，可能会导致酶的工作环境不够理想，按你说的你都用2ul酶了，可以考虑大点的体系，酶用量不变就是多加点buffer和水扩大。
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2楼2013-12-18 22:48:50
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-19 19:13:30
起始的质粒量就不是很多。
一样数量的DNA，长度越短染色越淡， 既然楼主切好的质粒本身都不亮的话那当然切出的条带会淡很多了。
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3楼2013-12-19 03:41:56
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湖畔狂想

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shengsong at 2013-12-18 22:48:50
质粒的浓度是多少？当你的体系中质粒浓度过高时，可能会导致酶的工作环境不够理想，按你说的你都用2ul酶了，可以考虑大点的体系，酶用量不变就是多加点buffer和水扩大。

跟酶切的时间长短关系不大呗？
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4楼2013-12-19 08:25:37
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湖畔狂想

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-12-19 03:41:56
起始的质粒量就不是很多。
一样数量的DNA，长度越短染色越淡， 既然楼主切好的质粒本身都不亮的话那当然切出的条带会淡很多了。

懂了
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5楼2013-12-19 08:26:46
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zhaolf

木虫 (著名写手)

胖虎爱唱歌

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-01-19 19:13:39
引用回帖:
4楼: Originally posted by 湖畔狂想 at 2013-12-18 12:25:37
跟酶切的时间长短关系不大呗？...

切5个小时已经是很长时间了。你看看一个单位酶的定义是什么，每微升酶有多少个单位，就知道1个小时可以切多少了，看起来你质粒的量非常少，不到半小时就可以切完了。
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我是胖虎，我是孩子王！
6楼2013-12-20 01:30:16
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yuerru2008

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-01-19 19:13:45
可能有两个问题;1胶没跑好；2质粒的量不多，要回收酶切片段的话，建议切50ul体系
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7楼2014-01-19 18:58:23
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

不亮应该是你质粒浓度有点小了。一般这样切3个小时可以的。
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8楼2014-01-19 19:29:07
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
或者是你的胶没治好。你看你的酶切亮度和Maeker的亮度是一样的。
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9楼2014-01-19 19:30:35
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zyyyyyyy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

酶切的时间很长了，我觉得是质量的浓度低了，多加一点质粒
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10楼2014-07-04 10:44:33
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