24小时热门版块排行榜    

查看: 2252  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

湖畔狂想

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒双酶切遇到点问题,求指教。 已有7人参与

今天刚做完的酶切
10μL体系:buffer 2μL、酶各0.5μL、质粒2μL、水5μL。
我切了5个小时。

第1、3泳道只有浅浅的带,大小正确,但是为什么会这么浅,难道是切的时间短?
还是有其他问题,求指教!
非常感谢
质粒双酶切遇到点问题,求指教。
atpG1-3,Rab18,1,2.2013.12.18.JPG
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaolf

木虫 (著名写手)

胖虎爱唱歌

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2014-01-19 19:13:39
引用回帖:
4楼: Originally posted by 湖畔狂想 at 2013-12-18 12:25:37
跟酶切的时间长短关系不大呗?...

切5个小时已经是很长时间了。你看看一个单位酶的定义是什么,每微升酶有多少个单位,就知道1个小时可以切多少了,看起来你质粒的量非常少,不到半小时就可以切完了。
我是胖虎,我是孩子王!
6楼2013-12-20 01:30:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

shengsong

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-18 23:32:09
质粒的浓度是多少?当你的体系中质粒浓度过高时,可能会导致酶的工作环境不够理想,按你说的你都用2ul酶了,可以考虑大点的体系,酶用量不变就是多加点buffer和水扩大。
2楼2013-12-18 22:48:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-01-19 19:13:30
起始的质粒量就不是很多。
一样数量的DNA,长度越短染色越淡, 既然楼主切好的质粒本身都不亮的话那当然切出的条带会淡很多了。
3楼2013-12-19 03:41:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

湖畔狂想

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by shengsong at 2013-12-18 22:48:50
质粒的浓度是多少?当你的体系中质粒浓度过高时,可能会导致酶的工作环境不够理想,按你说的你都用2ul酶了,可以考虑大点的体系,酶用量不变就是多加点buffer和水扩大。

跟酶切的时间长短关系不大呗?
4楼2013-12-19 08:25:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题,而不是去凝练问题 +5 瞬息宇宙 2026-09-01 11/550 2026-09-02 14:15 by simwe390
[基金申请] 要骂人了,新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西,结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 10/500 2026-09-02 11:35 by 大不刘6
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +5 瞬息宇宙 2026-08-31 5/250 2026-09-02 10:13 by 雨冰共舞
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 8/400 2026-09-02 02:42 by Leogzhya
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 面上函评意见出来了,像什么等级? 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
信息提示
请填处理意见