应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于克隆中出现卫星菌落的问题，求指教
91/1返回列表
查看: 3293  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

gundamba

木虫 (小有名气)

[求助] 关于克隆中出现卫星菌落的问题，求指教

最近做克隆，构建质粒，转化大肠，氨苄筛克隆，但是板子上的单克隆总是出现卫星菌落，PCR也没有阳性克隆，请问这是为什么呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-05-31 08:57:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

poog502

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-31 09:45:15
1、提高氨苄浓度。
2、换载体，比如promega的pGEM-T Easy载体，几乎未曾失手，缺点是太贵和酶切位点太少。
赞一下 回复此楼
2楼2012-05-31 09:01:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gundamba

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by poog502 at 2012-05-31 09:01:52
1、提高氨苄浓度。
2、换载体，比如promega的pGEM-T Easy载体，几乎未曾失手，缺点是太贵和酶切位点太少。

1.氨苄浓度肯定没有问题，一块倒的板子，其它人做没有出现这个问题。
2.第二个方法是换载体，是迫不得已的方法了，现在也在做，但是目前不太清楚问什么会发生这个问题
赞一下 回复此楼
3楼2012-05-31 09:47:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lansehaitun

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
估计是外源片段没连上，载体自身又自连了，建议每一步都进行切胶回收，或者更换酶切位点
赞一下 回复此楼
4楼2012-05-31 10:10:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

动力泉

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
出现卫星菌落是因为培养时间太长所致，建议缩短培养时间。对于没有阳性克隆建议酶切验证试试，也可能是T载体有问题，可以做对照试试
赞一下(1人) 回复此楼
好好学习
5楼2012-05-31 10:15:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

microblue

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用氨苄的时候要特别注意不能培养太久，因为β-内酰胺酶会把抗性菌落周围的氨苄降解掉，产生卫星菌落。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2012-05-31 11:38:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyamei123

银虫 (小有名气)
换感受态看看
回复此楼
言之无文行而不远
7楼2012-06-01 09:46:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yipianye69

金虫 (著名写手)
可以考虑换下感受态！
赞一下 回复此楼
8楼2012-06-27 14:54:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

moqiyilei

金虫 (小有名气)
看一下回收片段纯度怎么样，随便一个片段只要有A尾的都可以与T载体相连，就都会导致假阳性，所以菌P就没有。
赞一下 回复此楼
9楼2012-06-27 15:10:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gundamba 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭