| 查看: 3270 | 回复: 8 | ||
dingcong1216新虫 (小有名气)
|
[求助]
电泳图引物条带很亮，目的产物条带不亮 已有6人参与
|
|
PCR后跑电泳发现引物条带很亮，目的产物条带不亮。PCR程序为 94℃ 5min 94℃ 40S 52℃ 40S 72℃ 40S 38循环 72℃ 10min 4℃ 电泳120v 35min 最右边的两个是我的，右二为不加cDNA的对照，右一是加了模板的图。 请各位大侠给点儿建议，怎样优化一下条件  dell 2014-03-26 11 时 50 分.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有58人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR条带不清晰
已经有20人回复
- PCR电泳图分析（有杂带，有拖尾）求高手们帮忙分析一下
已经有4人回复
- PCR条带不够亮的原因
已经有22人回复
- 跑PCR，琼脂糖电泳没有条带出现
已经有14人回复
- 提取DNA后，PCR电泳无条带
已经有5人回复
- pcr产物电泳图
已经有14人回复
- RT—PCR引物、条带问题，新手求助，求意见，求建议！
已经有9人回复
- 第一次PCR产物电泳没有条带，请问用同一条引物跑2次PCR，能跑出条带吗？
已经有13人回复
- 荧光定量pcr溶解曲线好几个峰，但是电泳只有一条目的条带，怎么回事
已经有5人回复
- 总dna电泳有条带，但PCR后只有引物二聚体
已经有23人回复
- 5 RACE inner-PCR电泳结果无条带，是怎么回事？
已经有4人回复
- PCR产物的电泳条带出问题了！加了oading buffer和不加loading buffer的大小不一样！！
已经有12人回复
- PCR电泳，加样孔很亮，但目的条带却很淡，不知道怎么回事？
已经有24人回复
- 3‘RACE inner PCR 电泳结果总是有弥散现象回收条带不成带状什么原因啊？
已经有17人回复
- 胶回收产物连接转化后菌液PCR电泳条带出现问题
已经有8人回复
- PCR产物电泳时，为什么有的条带不亮，有的特别亮呀？
已经有4人回复
- pcr目的条带弱，而dimer很亮，怎么调整呢？
已经有6人回复
- PCR后凝胶电泳条带时有时无是怎么回事？
已经有5人回复
- 【求助/交流】PCR产物电泳条带弥散？？？
已经有30人回复
- 【求助/交流】请问PCR后的电泳只目的片段不清晰，并且出现引物带，应该从哪些方面调整
已经有6人回复
- 【求助/交流】pcr结果电泳条带很淡
已经有14人回复
- 【求助/交流】ISSR引物扩增产物电泳图，求助各位高手~~~
已经有10人回复
- 【求助/交流】目的基因PCR后电泳出现多条带
已经有7人回复
- 【求助/交流】PCR后电泳出现两条带是怎么回事？
已经有10人回复
- 【求助/交流】PCR引物设计出来了，但酶切之后电泳没条带啊
已经有18人回复
- 【求助/交流】（5.20更新）PCR产物电泳没有条带，why?
已经有20人回复
dingcong1216
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 380.7
- 散金: 15
- 帖子: 52
- 在线: 45.4小时
- 虫号: 2472660
- 注册: 2013-05-20
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2014-03-26 16:11:36
西门吹雪170
荣誉版主 (职业作家)
- MolEPI: 1
- 应助: 92 (初中生)
- 贵宾: 0.982
- 金币: 27278.4
- 散金: 1072
- 红花: 40
- 沙发: 2
- 帖子: 3092
- 在线: 438.7小时
- 虫号: 1209807
- 注册: 2011-02-22
- 性别: MM
- 专业: 认知科学
- 管辖: 分子生物
3楼2014-03-26 18:02:07
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-03-27 15:15:17
dingcong1216: 金币+1, ★有帮助 2014-04-30 17:18:19
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-03-27 15:15:17
dingcong1216: 金币+1, ★有帮助 2014-04-30 17:18:19
|
目标产物的亮度小，说明其量少，引物量说明引物量多，各人以为原因很多，一：引物与模板链的特异性不高，也就是说在延伸是只要一小部分能与模板结合，且引物的设计有问题。二：变性时出问题了，可能变性不完全。其次可以考虑体系中的离子强度，聚合酶特点，模板的熔点，平台效应，还有就是跑胶别太心急，低压长时跑的条带更漂亮。我也是刚解除pcr，有什么不对的地方，望谅解！！！ [ 发自小木虫客户端 ] |
4楼2014-03-26 20:52:18
wangweijian
金虫 (小有名气)
- 应助: 24 (小学生)
- 金币: 763
- 散金: 9
- 红花: 2
- 帖子: 208
- 在线: 89.5小时
- 虫号: 1090081
- 注册: 2010-09-05
- 专业: 女性生殖系统肿瘤
5楼2014-03-27 13:29:40
cm8002
金虫 (小有名气)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 3615.3
- 红花: 3
- 帖子: 105
- 在线: 162.6小时
- 虫号: 2482047
- 注册: 2013-05-26
- 专业: 自身免疫性疾病
6楼2014-03-30 23:11:21
怎么都行
银虫 (小有名气)
- 应助: 21 (小学生)
- 金币: 591.8
- 散金: 45
- 帖子: 229
- 在线: 38.2小时
- 虫号: 1050090
- 注册: 2010-06-30
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
dingcong1216(gyesang代发): 金币+4, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 20:23:31
dingcong1216: 金币+1, ★有帮助 2014-04-30 17:17:32
dingcong1216(gyesang代发): 金币+4, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 20:23:31
dingcong1216: 金币+1, ★有帮助 2014-04-30 17:17:32
|
可以从以下几点考虑可能的问题所在： 首先，如果不是扩增很长的片段，不需要38个循环这么长，一般30个循环就进入平台期了，32个循环足矣。 其次，如果是同源引物，体系中引物终浓度在0.2uM就行，引物多了反而有可能抑制结合延伸。 第三，若果是cDNA作为模版，最好采用热启动。 可用的解决办法：把第一轮扩增产物稀释至少100倍后作为模板，再扩增一轮，产物的量可能就达到你的实验要求了 |
7楼2014-03-31 01:07:51
【答案】应助回帖
★ ★
dingcong1216(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-17 12:26:51
dingcong1216(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-17 12:26:51
| 给你几个建议：一、请指明你说用的MARKER类型、目的条带大概长度；二、把你的引物序列也一同放在上面，分子、基因这块的影响因素很多、不确定性很高，需要很多条件来帮你分析排查原因；三、一般引物较短的情况下，变性、复性和延伸的时间比例为1:1:2的关系，你可以分别设置为30s、30s、60s，或者是40s、40s、90s；四、把你的PCR体系放上来，出现引物二聚体的原因可能是引物浓度过高或者是引物的特异性不高，你就只给我们一个PCR成像图和反应参数，我们没办法具体分析，希望你下次能注意些儿。 |
8楼2014-07-17 09:18:39
jurkat.1640
至尊木虫 (文坛精英)
- MolEPI: 1
- 应助: 908 (博后)
- 金币: 17157.7
- 散金: 1654
- 红花: 121
- 沙发: 41
- 帖子: 14521
- 在线: 2184.1小时
- 虫号: 514340
- 注册: 2008-02-28
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
9楼2014-07-17 16:52:49
10