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dingcong1216新虫 (小有名气)
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电泳图引物条带很亮，目的产物条带不亮 已有6人参与
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PCR后跑电泳发现引物条带很亮，目的产物条带不亮。PCR程序为 94℃ 5min 94℃ 40S 52℃ 40S 72℃ 40S 38循环 72℃ 10min 4℃ 电泳120v 35min 最右边的两个是我的，右二为不加cDNA的对照，右一是加了模板的图。 请各位大侠给点儿建议，怎样优化一下条件  dell 2014-03-26 11 时 50 分.jpg |
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6楼2014-03-30 23:11:21
dingcong1216
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2楼2014-03-26 16:11:36
【答案】应助回帖
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目标产物的亮度小，说明其量少，引物量说明引物量多，各人以为原因很多，一：引物与模板链的特异性不高，也就是说在延伸是只要一小部分能与模板结合，且引物的设计有问题。二：变性时出问题了，可能变性不完全。其次可以考虑体系中的离子强度，聚合酶特点，模板的熔点，平台效应，还有就是跑胶别太心急，低压长时跑的条带更漂亮。我也是刚解除pcr，有什么不对的地方，望谅解！！！ [ 发自小木虫客户端 ] |
4楼2014-03-26 20:52:18
wangweijian
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