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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】ISSR引物扩增产物电泳图，求助各位高手~~~
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菜鸟难当

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】ISSR引物扩增产物电泳图，求助各位高手~~~ 已有8人参与

大家好~下图是我用ISSR引物扩增产物的电泳图。。。
三幅图的扩增体系都是一样的（除引物外）
我试了二十几个引物了，只有第一副图的这个引物条带清晰，其它的根本分不清条带，请教高手们分析原因~多谢，多谢，多谢
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1楼 2010-10-29 16:22:45
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)
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引用回帖:
Originally posted by 菜鸟难当 at 2010-10-29 16:22:45:
大家好~下图是我用ISSR引物扩增产物的电泳图。。。
三幅图的扩增体系都是一样的（除引物外）
我试了二十几个引物了，只有第一副图的这个引物条带清晰，其它的根本分不清条带，请教高手们分析原因~多谢，多谢，多 ...

这就对了，ISSR是要筛选引物的，因为他的100条引物不是对所有的物种都会有条带的，物种不同或者品种不同，所适用的引物自然不同。你选用的20个引物是针对你的物种，以前有人筛选好的吗？如果是别人在你物种上筛选好的，那就要优化条件了，如果不是，那就正常了，引物是筛选出来的，不是选择的。我做了100条，最后只晒出来10几条对我的物种好使。你最好也筛选一下引物。
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戒骄戒躁，坦荡做人，平常心做事，享受生活之美！！
5楼2011-05-13 11:06:18
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普通回帖

奋发-言午

银虫 (小有名气)
★
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帮顶，等待高手解答。。
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2楼2010-10-29 20:24:51
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
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去看看文献报道先。 issr就是个体力活。 要有耐心。
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3楼2010-10-29 23:01:28
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zjx4700

木虫 (小有名气)
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想问一下做ISSR分子标记需要几条引物啊，刚接触有点不太了解
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油菜农业家！
4楼2011-05-13 09:27:42
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zjx4700 at 2011-05-13 09:27:42:
想问一下做ISSR分子标记需要几条引物啊，刚接触有点不太了解

要看你的物种了，ISSR就是通用的100条引物，但是针对你的物种不一定会有几个能出条带的，所以应该进行筛选，一般8条就够了，更多更好了！
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戒骄戒躁，坦荡做人，平常心做事，享受生活之美！！
6楼2011-05-13 11:08:13
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)
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引用回帖:
Originally posted by 菜鸟难当 at 2010-10-29 16:22:45:
大家好~下图是我用ISSR引物扩增产物的电泳图。。。
三幅图的扩增体系都是一样的（除引物外）
我试了二十几个引物了，只有第一副图的这个引物条带清晰，其它的根本分不清条带，请教高手们分析原因~多谢，多谢，多 ...

还有，补充一点，就是你做的琼脂糖胶，因为检测用的胶是2%的，做胶是非常关键的，有时候PCR挺好，但是检测结果不好，这个从Marker就能看出来。
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戒骄戒躁，坦荡做人，平常心做事，享受生活之美！！
7楼2011-05-13 11:13:23
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谢琳丹

新虫 (初入文坛)
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引用回帖:
1597574楼: Originally posted by yixuanwin at 2010-10-29 23:01:28:
去看看文献报道先。 issr就是个体力活。 要有耐心。

每次加一个，一般从100个引物中刷选出12——15个条带清晰的引物
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8楼2012-04-12 20:56:26
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芕星悦

新虫 (小有名气)
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预计要做ISSR标记，从这里学习一下
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9楼2012-10-19 21:08:18
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巅峰射手

木虫 (著名写手)

中国农大
★
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引用回帖:
2340347楼: Originally posted by 疯狂修行者 at 2011-05-13 11:08:13
要看你的物种了，ISSR就是通用的100条引物，但是针对你的物种不一定会有几个能出条带的，所以应该进行筛选，一般8条就够了，更多更好了！...

尊敬的前辈  您好！  我想问下 Issr的引物是一个体系就用一条吗？还是可以两条混用？ 谢谢回答
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为梦想而活
10楼2013-03-04 22:11:57
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