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陈年芬芳

新虫 (小有名气)

[求助] 多态性条带怎么统计?有图,大家帮帮忙。谢谢

我做ISSR的,这张图,是9个个体,一对引物得到的结果。很多说法是计0和1,但是如果是不同的电泳图,产物的位置可能会有差异,这个多态位点还可靠吗?有没有介绍统计这些图的资料啊?文献说的也不全,搞不懂啊。急死人了,谢谢各位高手帮忙!


[ Last edited by 1949stone on 2011-12-27 at 12:59 ]
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Sarah_Shy

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

陈年芬芳: 回帖置顶 2011-12-09 20:03:40
1949stone(MolEPI+1): very good 2011-12-27 12:59:23
这个条带统计是蛮烦的,你们实验室没人做吗?可以请教下。我毕业论文就是做的就是这个,在这里我怕说了你也很难理解。我将就说一下看你自己理解吧。
统计条带你是先看同一个引物所有样品总共得到多少个位点,然后再分别看每一个样品哪个位点没条带就记为0,哪个位点有条带记为1.
就比如你这张图,9个样,总共有5个位点,为了方便我这里从上往下标注为1,2,3,4,5。第一个样3和5的位点上有条带,记为00101。第二个样和第三个样时一样的都是3位点上有,记为00100.第四个1,5位点有,记为10001.第五个样1,2,5位点有,记为11001.第六个样1.2.4位点有,记为11010.第七个样3.5位点有,记为00101.。。。下面你自己看吧,应该能理解了吧。
至于统计软件一般文献上都是有的,你自己好好查查看吧,不同的软件用于不同的分析。
4楼2011-12-09 15:54:03
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Sarah_Shy

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


陈年芬芳: 回帖置顶 2011-12-12 12:13:55
基本上,一个引物对不同样本的扩增得到的条带都差不多,你可以对比maker看条带大致的位置,纵观一个引物所有样本的扩增条带,大致确定有多少条带,条带大小为多少,然后再分别看每个样本的带型进行统计。分子标记最后的条带本来就是靠人为的统计,只能靠自己的感觉去判定。这个0,1矩阵的输入真的是很累人的一件事情,胶图一定要跑的好将来会方便很多。
有什么问题你再问吧,我可能不能及时回答你,但一有空就会上来看的。你现在先把条件优化的好一点,争取把胶图跑好,统计条带要等所有样本都跑完了才能统计,所以也不及。做PCR跑胶也是一个很耗时间的事情。

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7楼2011-12-11 21:17:27
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陈年芬芳

新虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by Sarah_Shy at 2011-12-11 21:17:27:
基本上,一个引物对不同样本的扩增得到的条带都差不多,你可以对比maker看条带大致的位置,纵观一个引物所有样本的扩增条带,大致确定有多少条带,条带大小为多少,然后再分别看每个样本的带型进行统计。分子标记 ...

太好了,太谢谢你了!
8楼2011-12-12 12:13:29
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pyz1979

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
陈年芬芳(金币+2): ★★★很有帮助 谢谢啦!很有帮助! 2011-12-27 12:40:54
wanhscn(金币+6): 鼓励应助!很好!先记下 whs! 2011-12-27 14:39:16
补充一些内容:
将所有样品跑出图后,可以用gel-pro analyzer进行定量分析,因为这个软件可以根据不同分子量在容许范围内列出不同行,例如:
3886                        3857
2182                        2200
1985                        1985
1776        1788                1776
1600        1624                1612
1400        1400        1330        1390
                       
1192        1136                1192
                       
994                        994

这样可以手动将有数字的改成“1”,没数字的改成“0“,然后用NTSYS软件进行聚类分析,构建树状图。

提示:电泳尽量要跑好跑齐,最好有两个或多个标准分子量,这样在构建树状图时可以观察标准分子量的相似度是否很高,如果不高,说明电泳效果很差。
9楼2011-12-27 10:57:33
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liuqinggc065

新虫 (初入文坛)

各位大侠,我最近也做ISSR,筛选了10条引物,用的是NTSYS聚类分析软件!每个引物做成excel的1,0矩阵!然后这样的话会有10个矩阵,每个矩阵用该软件生成一个聚类图,但是10个矩阵怎么放在一起分析啊!我的是用10个引物做300多了DNA样本,分析这些样本的关系!不知道怎么做,请教高手!
年轻人爱拼才会赢!
23楼2015-01-08 13:22:05
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普通回帖

min930

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): 欢迎交流 2011-12-08 18:56:39
p的条件要优化,如果条件没法再优化了,就看看引物特异性,我放下很多年了,目前只能提这么点意见
2楼2011-12-08 11:16:30
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陈年芬芳

新虫 (小有名气)

1949stone: 有专业的软件 可以看看文献 2011-12-09 01:03:30
引用回帖:
2楼: Originally posted by min930 at 2011-12-08 11:16:30:
p的条件要优化,如果条件没法再优化了,就看看引物特异性,我放下很多年了,目前只能提这么点意见

条件正在优化中,优化好了就要大批量的做了,但是这些图怎么统计啊,看有很多软件,都云里雾里的。
3楼2011-12-08 15:03:00
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陈年芬芳

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Sarah_Shy at 2011-12-09 15:54:03:
这个条带统计是蛮烦的,你们实验室没人做吗?可以请教下。我毕业论文就是做的就是这个,在这里我怕说了你也很难理解。我将就说一下看你自己理解吧。
统计条带你是先看同一个引物所有样品总共得到多少个位点,然后 ...

真的太谢谢你啦,这么详细的解释让我终于有些开窍了。
还有一个问题是,同一引物扩增的结果肯定不会在一张图上,不同时间跑的电泳图条带的位置可能也会不一样,这个怎么处理啊?期待你的回复,谢谢!
5楼2011-12-09 19:59:09
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陈年芬芳

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Sarah_Shy at 2011-12-09 15:54:03:
这个条带统计是蛮烦的,你们实验室没人做吗?可以请教下。我毕业论文就是做的就是这个,在这里我怕说了你也很难理解。我将就说一下看你自己理解吧。
统计条带你是先看同一个引物所有样品总共得到多少个位点,然后 ...

我们实验室没人做啊,老师也不懂,真是欲哭无泪啊。
6楼2011-12-09 20:04:24
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陈年芬芳

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by pyz1979 at 2011-12-27 10:57:33:
补充一些内容:
将所有样品跑出图后,可以用gel-pro analyzer进行定量分析,因为这个软件可以根据不同分子量在容许范围内列出不同行,例如:
3886                        3857
2182                        2200
1985                        1985
1776        1788                1776
1600        16 ...

太谢谢你啦,讲的很详细呢。
这个软件我才接触,很方便,也很灵敏,您说的多点几个marker,是指同一种还是不同种啊?比如一个DL2000,一个100bp ladder么?还有构建构建树状图时可以观察标准分子量的相似度是否很高,这个怎么操作啊?是把marker也变成0/1矩阵作为一个种么?
10楼2011-12-27 12:46:05
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