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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】Western 条带拖尾，有图，望大家帮忙找原因
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xiaoyan08

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】Western 条带拖尾，有图，望大家帮忙找原因 已有5人参与

是72kd的一个蛋白，是脾酪氨酸激酶（SYK）。我跑的是8%的分离胶，以前也跑过12%的胶，均拖尾拖得很严重，大家帮忙找找原因。
8%分离胶


12%分离胶

这是对比度调过之后


[ Last edited by xiaoyan08 on 2010-9-29 at 10:22 ]
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1楼 2010-09-29 10:19:41
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maoyz0127

金虫 (正式写手)
★
xiaoyan08(金币+3): 2010-09-29 10:43:34
1949stone(金币+1):maybe 2010-09-29 10:52:41
上样时有沉淀吧 或者配的胶有问题 比如丙烯酰胺配稀了 或者pH不准
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2楼2010-09-29 10:27:31
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xiaoyan08

木虫 (正式写手)

我同意第一个可能性

★
amisking(金币+1):鼓励交流！ 2010-09-29 19:14:39
引用回帖:
Originally posted by maoyz0127 at 2010-09-29 10:27:31:
上样时有沉淀吧 或者配的胶有问题 比如丙烯酰胺配稀了 或者pH不准

我查的也说是溶解不均，可是我们老板非说是蛋白降解了，蛋白降解应该是变成小分子，而不是向大分子方向拖尾吧。
那我把样品离心下，取上清做一下。
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3楼2010-09-29 10:45:33
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maoyz0127

金虫 (正式写手)
xiaoyan08(金币+3):谢谢 2010-09-30 09:04:21
蛋白降解也是有可能的，降解后不同分子量的蛋白相互聚合，更容易沉淀
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4楼2010-09-30 08:39:15
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xiaoyan08

木虫 (正式写手)

降解？

引用回帖:
Originally posted by maoyz0127 at 2010-09-30 08:39:15:
蛋白降解也是有可能的，降解后不同分子量的蛋白相互聚合，更容易沉淀

为什么只是在大分子方向有拖尾呢，难道只是聚合成大分子？看来以后上样离心取上清是比较谨慎的做法
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5楼2010-09-30 09:06:03
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maoyz0127

金虫 (正式写手)
我们上样之前都是先离一下的
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6楼2010-09-30 09:06:59
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2009227004

金虫 (正式写手)
xiaoyan08(金币+1):谢谢 2010-10-02 16:29:48
上样前可以离心一下，再者检查下你的电泳液是否混浊，如果电泳液不干净也有可能导致拖尾的！！！
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当别人都在假装正经的时候，我就假装不正经。
7楼2010-09-30 11:27:58
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xiaoyan08

木虫 (正式写手)

应该多少转离心呢

引用回帖:
Originally posted by 2009227004 at 2010-09-30 11:27:58:
上样前可以离心一下，再者检查下你的电泳液是否混浊，如果电泳液不干净也有可能导致拖尾的！！！

应该多少转离心呢，我今天用的是1000rpm，5min。不知道行不行
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8楼2010-10-08 09:51:54
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xiaoyan08

木虫 (正式写手)

多少转离心啊

引用回帖:
Originally posted by maoyz0127 at 2010-09-30 09:06:59:
我们上样之前都是先离一下的

你们都多少转离心啊，时间多少
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9楼2010-10-08 09:52:54
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xiaoyan08

木虫 (正式写手)

多少转离心啊

引用回帖:
Originally posted by 2009227004 at 2010-09-30 11:27:58:
上样前可以离心一下，再者检查下你的电泳液是否混浊，如果电泳液不干净也有可能导致拖尾的！！！

你们多少转离心啊，时间多少。我刚刚用的是1000rpm，5min。不知道行不行
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10楼2010-10-08 11:05:37
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