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xiaoyan08

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】Western 条带拖尾,有图,望大家帮忙找原因 已有5人参与

是72kd的一个蛋白,是脾酪氨酸激酶(SYK)。我跑的是8%的分离胶,以前也跑过12%的胶,均拖尾拖得很严重,大家帮忙找找原因。
8%分离胶


12%分离胶

这是对比度调过之后


[ Last edited by xiaoyan08 on 2010-9-29 at 10:22 ]
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maoyz0127

金虫 (正式写手)


xiaoyan08(金币+3): 2010-09-29 10:43:34
1949stone(金币+1):maybe 2010-09-29 10:52:41
上样时有沉淀吧 或者配的胶有问题 比如丙烯酰胺配稀了 或者pH不准
2楼2010-09-29 10:27:31
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xiaoyan08

木虫 (正式写手)

我同意第一个可能性


amisking(金币+1):鼓励交流! 2010-09-29 19:14:39
引用回帖:
Originally posted by maoyz0127 at 2010-09-29 10:27:31:
上样时有沉淀吧 或者配的胶有问题 比如丙烯酰胺配稀了 或者pH不准

我查的也说是溶解不均,可是我们老板非说是蛋白降解了,蛋白降解应该是变成小分子,而不是向大分子方向拖尾吧。
那我把样品离心下,取上清做一下。
3楼2010-09-29 10:45:33
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maoyz0127

金虫 (正式写手)

xiaoyan08(金币+3):谢谢 2010-09-30 09:04:21
蛋白降解也是有可能的,降解后不同分子量的蛋白相互聚合,更容易沉淀
4楼2010-09-30 08:39:15
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xiaoyan08

木虫 (正式写手)

降解?

引用回帖:
Originally posted by maoyz0127 at 2010-09-30 08:39:15:
蛋白降解也是有可能的,降解后不同分子量的蛋白相互聚合,更容易沉淀

为什么只是在大分子方向有拖尾呢,难道只是聚合成大分子?看来以后上样离心取上清是比较谨慎的做法
5楼2010-09-30 09:06:03
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maoyz0127

金虫 (正式写手)

我们上样之前都是先离一下的
6楼2010-09-30 09:06:59
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2009227004

金虫 (正式写手)

xiaoyan08(金币+1):谢谢 2010-10-02 16:29:48
上样前可以离心一下,再者检查下你的电泳液是否混浊,如果电泳液不干净也有可能导致拖尾的!!!
当别人都在假装正经的时候,我就假装不正经。
7楼2010-09-30 11:27:58
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xiaoyan08

木虫 (正式写手)

应该多少转离心呢

引用回帖:
Originally posted by 2009227004 at 2010-09-30 11:27:58:
上样前可以离心一下,再者检查下你的电泳液是否混浊,如果电泳液不干净也有可能导致拖尾的!!!

应该多少转离心呢,我今天用的是1000rpm,5min。不知道行不行
8楼2010-10-08 09:51:54
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xiaoyan08

木虫 (正式写手)

多少转离心啊

引用回帖:
Originally posted by maoyz0127 at 2010-09-30 09:06:59:
我们上样之前都是先离一下的

你们都多少转离心啊,时间多少
9楼2010-10-08 09:52:54
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xiaoyan08

木虫 (正式写手)

多少转离心啊

引用回帖:
Originally posted by 2009227004 at 2010-09-30 11:27:58:
上样前可以离心一下,再者检查下你的电泳液是否混浊,如果电泳液不干净也有可能导致拖尾的!!!

你们多少转离心啊,时间多少。我刚刚用的是1000rpm,5min。不知道行不行
10楼2010-10-08 11:05:37
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