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2009227004

金虫 (正式写手)

可以了,我们一般这就这么!!或者十分钟也行!!

xiaoyan08(金币+3):谢谢参与讨论,偶的问题也解决了 2010-10-21 09:25:44
引用回帖:
Originally posted by 2009227004 at 2010-09-30 11:27:58:
上样前可以离心一下,再者检查下你的电泳液是否混浊,如果电泳液不干净也有可能导致拖尾的!!!

可以了,我们一般这就这么!!或者十分钟也行!!
当别人都在假装正经的时候,我就假装不正经。
11楼2010-10-08 12:04:10
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xiaoyan08

木虫 (正式写手)

问题解决了

同志们,偶的问题解决了。
1、偶重新配制了loading buffer;
2、裂解完细胞后取了部分上清做蛋白定量,然后立马加了等量loading buffer
。以前偶都等定量结束才加的loading buffer;
3、偶每次上样前,也有离心哦:
4、一切程序一定要在冰上进行。
12楼2010-10-21 09:24:34
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zzzmmmlll

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by xiaoyan08 at 2010-10-21 09:24:34
同志们,偶的问题解决了。
1、偶重新配制了loading buffer;
2、裂解完细胞后取了部分上清做蛋白定量,然后立马加了等量loading buffer
。以前偶都等定量结束才加的loading buffer;
3、偶每次上样前,也有离心 ...

请问,你是裂解细胞后离心取上清,其中取部分上清做蛋白定量,剩余上清立刻加loading buffer,然后立刻95°变性吗,
loading buffer等量是等体积的吗,是几乘的呢,
13楼2013-12-29 20:56:11
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mars731

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
13楼: Originally posted by zzzmmmlll at 2013-12-29 20:56:11
请问,你是裂解细胞后离心取上清,其中取部分上清做蛋白定量,剩余上清立刻加loading buffer,然后立刻95°变性吗,
loading buffer等量是等体积的吗,是几乘的呢,...

他加等体积就是2X的
14楼2014-06-04 16:36:39
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神经生物

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
蛋白降解时也会有类似情况,考虑一下蛋白有没有降解。蛋白低温收集,保存,减少反复冻融。
15楼2014-07-06 10:56:47
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hbqnjfu

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
最近我也出现了楼主的问题,想请教楼主,为什么楼主需要离心完取上清上样?我以前都是离心完,吹匀上样。
16楼2014-08-08 13:20:54
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ydd592418550

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我最近也在跑这个蛋白,想问楼主转膜时间是多少呀?抗体稀释浓度是1:800 么
17楼2017-03-26 14:45:09
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