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xiaoyan08

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】Western 条带拖尾,有图,望大家帮忙找原因 已有5人参与

是72kd的一个蛋白,是脾酪氨酸激酶(SYK)。我跑的是8%的分离胶,以前也跑过12%的胶,均拖尾拖得很严重,大家帮忙找找原因。
8%分离胶


12%分离胶

这是对比度调过之后


[ Last edited by xiaoyan08 on 2010-9-29 at 10:22 ]
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hbqnjfu

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
最近我也出现了楼主的问题,想请教楼主,为什么楼主需要离心完取上清上样?我以前都是离心完,吹匀上样。
16楼2014-08-08 13:20:54
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maoyz0127

金虫 (正式写手)


xiaoyan08(金币+3): 2010-09-29 10:43:34
1949stone(金币+1):maybe 2010-09-29 10:52:41
上样时有沉淀吧 或者配的胶有问题 比如丙烯酰胺配稀了 或者pH不准
2楼2010-09-29 10:27:31
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xiaoyan08

木虫 (正式写手)

我同意第一个可能性


amisking(金币+1):鼓励交流! 2010-09-29 19:14:39
引用回帖:
Originally posted by maoyz0127 at 2010-09-29 10:27:31:
上样时有沉淀吧 或者配的胶有问题 比如丙烯酰胺配稀了 或者pH不准

我查的也说是溶解不均,可是我们老板非说是蛋白降解了,蛋白降解应该是变成小分子,而不是向大分子方向拖尾吧。
那我把样品离心下,取上清做一下。
3楼2010-09-29 10:45:33
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maoyz0127

金虫 (正式写手)

xiaoyan08(金币+3):谢谢 2010-09-30 09:04:21
蛋白降解也是有可能的,降解后不同分子量的蛋白相互聚合,更容易沉淀
4楼2010-09-30 08:39:15
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