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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】Western 条带拖尾，有图，望大家帮忙找原因
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xiaoyan08

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】Western 条带拖尾，有图，望大家帮忙找原因 已有5人参与

是72kd的一个蛋白，是脾酪氨酸激酶（SYK）。我跑的是8%的分离胶，以前也跑过12%的胶，均拖尾拖得很严重，大家帮忙找找原因。
8%分离胶


12%分离胶

这是对比度调过之后


[ Last edited by xiaoyan08 on 2010-9-29 at 10:22 ]
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1楼 2010-09-29 10:19:41
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zzzmmmlll

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by xiaoyan08 at 2010-10-21 09:24:34
同志们，偶的问题解决了。
1、偶重新配制了loading buffer；
2、裂解完细胞后取了部分上清做蛋白定量，然后立马加了等量loading buffer
。以前偶都等定量结束才加的loading buffer；
3、偶每次上样前，也有离心 ...

请问，你是裂解细胞后离心取上清，其中取部分上清做蛋白定量，剩余上清立刻加loading buffer，然后立刻95°变性吗，
loading buffer等量是等体积的吗，是几乘的呢，
赞一下 回复此楼
13楼2013-12-29 20:56:11
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maoyz0127

金虫 (正式写手)
★
xiaoyan08(金币+3): 2010-09-29 10:43:34
1949stone(金币+1):maybe 2010-09-29 10:52:41
上样时有沉淀吧 或者配的胶有问题 比如丙烯酰胺配稀了 或者pH不准
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2楼2010-09-29 10:27:31
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xiaoyan08

木虫 (正式写手)

我同意第一个可能性

★
amisking(金币+1):鼓励交流！ 2010-09-29 19:14:39
引用回帖:
Originally posted by maoyz0127 at 2010-09-29 10:27:31:
上样时有沉淀吧 或者配的胶有问题 比如丙烯酰胺配稀了 或者pH不准

我查的也说是溶解不均，可是我们老板非说是蛋白降解了，蛋白降解应该是变成小分子，而不是向大分子方向拖尾吧。
那我把样品离心下，取上清做一下。
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3楼2010-09-29 10:45:33
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maoyz0127

金虫 (正式写手)
xiaoyan08(金币+3):谢谢 2010-09-30 09:04:21
蛋白降解也是有可能的，降解后不同分子量的蛋白相互聚合，更容易沉淀
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4楼2010-09-30 08:39:15
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