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陈年芬芳

新虫 (小有名气)

[求助] 多态性条带怎么统计?有图,大家帮帮忙。谢谢

我做ISSR的,这张图,是9个个体,一对引物得到的结果。很多说法是计0和1,但是如果是不同的电泳图,产物的位置可能会有差异,这个多态位点还可靠吗?有没有介绍统计这些图的资料啊?文献说的也不全,搞不懂啊。急死人了,谢谢各位高手帮忙!


[ Last edited by 1949stone on 2011-12-27 at 12:59 ]
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pyz1979

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
陈年芬芳(金币+2): ★★★很有帮助 谢谢啦!很有帮助! 2011-12-27 12:40:54
wanhscn(金币+6): 鼓励应助!很好!先记下 whs! 2011-12-27 14:39:16
补充一些内容:
将所有样品跑出图后,可以用gel-pro analyzer进行定量分析,因为这个软件可以根据不同分子量在容许范围内列出不同行,例如:
3886                        3857
2182                        2200
1985                        1985
1776        1788                1776
1600        1624                1612
1400        1400        1330        1390
                       
1192        1136                1192
                       
994                        994

这样可以手动将有数字的改成“1”,没数字的改成“0“,然后用NTSYS软件进行聚类分析,构建树状图。

提示:电泳尽量要跑好跑齐,最好有两个或多个标准分子量,这样在构建树状图时可以观察标准分子量的相似度是否很高,如果不高,说明电泳效果很差。
9楼2011-12-27 10:57:33
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pyz1979

铜虫 (初入文坛)

我说的marker就是一样的marker,主要是看电泳效果,如果两个marker的条带基本都在一条线上的话,说明效果比较好。至于标准分子量相似度没有做过,我在做0、1时直接将marker删除了。

至于两张不同时期电泳图条带分布不一样的问题,我是这样解决的,仅供参考:
1)对凝胶成像软件进行设置,我的是Image Lab,可以建立一个实验协议,对于成像的位置、大小都规定好,每次放胶的时候都放在那个位置,这样可以稍微保证图片基本一致。

2)使用photoshop软件,对其中一张图片进行图像大小的重新设置,从而使图中Marker条带与另一张基本一致,之后进行拼接,因为Gel-pro只能对一张图片产生excel表,如果分别分析的话,之后的0、1表不太好合并

即便这样,误差也是非常地大,目前准备接触bionumerics软件,这个软件貌似能解决这些问题,功能比较齐全,不过没有盗版,而且非常贵。
17楼2012-06-29 09:19:54
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