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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » ISSR电泳跑久条带才能分开？
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墨池

银虫 (小有名气)

[求助] ISSR电泳跑久条带才能分开？

这是在150V电压下，跑了1h的图片，貌似顶端几条带分的不是很开，有点挤，高手指点，有没有必要再多跑一会，让带分的更好。。。（见图）

问题图
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阳光暖暖的，心情暖暖的，努力做个精致的女人！
1楼 2011-12-31 22:18:53
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励交流！元旦快乐！ 2012-01-01 10:18:34
墨池(金币+1): 2012-01-05 09:26:17
个人认为，已经分开了。如果想分得更开一些，可以提高点胶的浓度，电压100V跑下看。还有楼主所有泳道都有拖尾，可以考虑提高点退火温度，稍微减少点循环次数。
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2楼2012-01-01 09:53:33
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墨池

银虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by chenguestc at 2012-01-01 09:53:33:
个人认为，已经分开了。如果想分得更开一些，可以提高点胶的浓度，电压100V跑下看。还有楼主所有泳道都有拖尾，可以考虑提高点退火温度，稍微减少点循环次数。

提高温度会P不出来呀，40个循环，依你的经验，认为减少到多少合适呢？
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阳光暖暖的，心情暖暖的，努力做个精致的女人！
3楼2012-01-05 09:27:05
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

墨池(金币+1): 2012-01-05 11:19:52
我不晓得你现在用的退火温度是多少啊，你可以适当调高个1-2度看，或者用touch-down试试。循环数可以减到35-38个看。
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4楼2012-01-05 10:36:22
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

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难道不能跑39：1的page胶？
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真相是最大的奢侈品
5楼2012-01-05 11:25:20
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墨池

银虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by chenguestc at 2012-01-05 10:36:22:
我不晓得你现在用的退火温度是多少啊，你可以适当调高个1-2度看，或者用touch-down试试。循环数可以减到35-38个看。

我说下具体情况吧。引物UBC827，用的TD-PCR:57度-51度，7个循环，每个循环降1度（94度1分钟，退火温度1分钟，72度1.5分钟）；33个循环（94度1分钟，50度1分钟，72度1.5分钟）；最后72度5分钟。

您是专家，给分析分析
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阳光暖暖的，心情暖暖的，努力做个精致的女人！
6楼2012-01-05 11:30:05
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

可以60-53度TD试试，先用琼脂糖跑下看是否有改观。
斑竹建议也很好，也可以跑下银染，就是可能带纹可能会更多，弱带可能会增加很多。
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7楼2012-01-05 12:40:04
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174609113

银虫 (小有名气)
请问一下 你的反应体系是多少啊？  我也做pcr,但是跑不出条带 呵呵
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8楼2012-07-09 10:21:27
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