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墨池

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[求助] ISSR电泳跑久条带才能分开？

这是在150V电压下，跑了1h的图片，貌似顶端几条带分的不是很开，有点挤，高手指点，有没有必要再多跑一会，让带分的更好。。。（见图）

问题图

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1楼 2011-12-31 22:18:53

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chenguestc

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【答案】应助回帖

★
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墨池(金币+1): 2012-01-05 09:26:17

个人认为，已经分开了。如果想分得更开一些，可以提高点胶的浓度，电压100V跑下看。还有楼主所有泳道都有拖尾，可以考虑提高点退火温度，稍微减少点循环次数。

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2楼2012-01-01 09:53:33

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墨池

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楼: Originally posted by chenguestc at 2012-01-01 09:53:33:
个人认为，已经分开了。如果想分得更开一些，可以提高点胶的浓度，电压100V跑下看。还有楼主所有泳道都有拖尾，可以考虑提高点退火温度，稍微减少点循环次数。

提高温度会P不出来呀，40个循环，依你的经验，认为减少到多少合适呢？

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阳光暖暖的，心情暖暖的，努力做个精致的女人！

3楼2012-01-05 09:27:05

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chenguestc

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墨池(金币+1): 2012-01-05 11:19:52

我不晓得你现在用的退火温度是多少啊，你可以适当调高个1-2度看，或者用touch-down试试。循环数可以减到35-38个看。

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4楼2012-01-05 10:36:22

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wanhscn

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【答案】应助回帖

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难道不能跑39：1的page胶？

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真相是最大的奢侈品

5楼2012-01-05 11:25:20

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楼: Originally posted by chenguestc at 2012-01-05 10:36:22:
我不晓得你现在用的退火温度是多少啊，你可以适当调高个1-2度看，或者用touch-down试试。循环数可以减到35-38个看。

我说下具体情况吧。引物UBC827，用的TD-PCR:57度-51度，7个循环，每个循环降1度（94度1分钟，退火温度1分钟，72度1.5分钟）；33个循环（94度1分钟，50度1分钟，72度1.5分钟）；最后72度5分钟。

您是专家，给分析分析

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6楼2012-01-05 11:30:05

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chenguestc

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【答案】应助回帖

可以60-53度TD试试，先用琼脂糖跑下看是否有改观。
斑竹建议也很好，也可以跑下银染，就是可能带纹可能会更多，弱带可能会增加很多。

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7楼2012-01-05 12:40:04

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请问一下你的反应体系是多少啊？我也做pcr,但是跑不出条带呵呵

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8楼2012-07-09 10:21:27

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