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doubleping

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[求助] V3区pcr出现非特异性条带怎么办？

我用16S的pcr产物扩增V3区，目的片段在250bp左右，但是我扩增出来出现了四条很淡的非特异性条带，大小在1400-300bp之间，不明白这是为什么？给位大神给点意见吧！！！！
我使用体系是2*taq mastermix 15ul,引物 10um/ml 各1ul,模版1ul,ddH2O 12ul，总共30ul，程序是touchdownPCR程序，枪头和水、离心管都是高温灭菌过的，不过没有在超净台和冰上操作。

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1楼 2013-07-21 11:02:13

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doubleping

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2楼: Originally posted by wubingqi at 2013-07-21 11:48:53
延伸时间和退火温度是多少？
试试减少一些引物和模版的量

我用的是touchdownPCR程序，65-55摄氏度，一分钟

4楼2013-07-21 12:00:11

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wubingqi

木虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-07-21 12:39:52

延伸时间和退火温度是多少？
试试减少一些引物和模版的量

2楼2013-07-21 11:48:53

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久久季雨

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【答案】应助回帖

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能不能把图弄上来！也不一定是非特异性条带~

我就是我！带不了假面具

3楼2013-07-21 11:58:58

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doubleping

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引用回帖:

3楼: Originally posted by 久久季雨 at 2013-07-21 11:58:58
能不能把图弄上来！也不一定是非特异性条带~

我的图是tif格式的，一直上传不了，请指点

5楼2013-07-21 16:45:21

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