24小时热门版块排行榜    

查看: 1219  |  回复: 6

doubleping

新虫 (小有名气)

[求助] V3区pcr出现非特异性条带怎么办?

我用16S的pcr产物扩增V3区,目的片段在250bp左右,但是我扩增出来出现了四条很淡的非特异性条带,大小在1400-300bp之间,不明白这是为什么?给位大神给点意见吧!!!!
我使用体系是2*taq mastermix 15ul,引物 10um/ml  各1ul,模版1ul,ddH2O 12ul,总共30ul,程序是touchdownPCR程序,枪头和水、离心管都是高温灭菌过的,不过没有在超净台和冰上操作。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wubingqi

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助! 2013-07-21 12:39:52
延伸时间和退火温度是多少?
试试减少一些引物和模版的量
2楼2013-07-21 11:48:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

久久季雨

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
能不能把图弄上来!也不一定是非特异性条带~
我就是我!带不了假面具
3楼2013-07-21 11:58:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doubleping

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wubingqi at 2013-07-21 11:48:53
延伸时间和退火温度是多少?
试试减少一些引物和模版的量

我用的是touchdownPCR程序,65-55摄氏度,一分钟
4楼2013-07-21 12:00:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doubleping

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 久久季雨 at 2013-07-21 11:58:58
能不能把图弄上来!也不一定是非特异性条带~

我的图是tif格式的,一直上传不了,请指点
5楼2013-07-21 16:45:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wubingqi

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by doubleping at 2013-07-21 12:00:11
我用的是touchdownPCR程序,65-55摄氏度,一分钟...

降落pcr没有问题,但是250bp延伸一分钟太长了,最多半分种足够了。我570bp才用40秒。
6楼2013-07-22 09:30:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doubleping

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by wubingqi at 2013-07-22 09:30:45
降落pcr没有问题,但是250bp延伸一分钟太长了,最多半分种足够了。我570bp才用40秒。...

嗯,谢谢,我再试试
7楼2013-07-22 10:41:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 doubleping 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上意见出来了 +6 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 12/600 2026-08-29 17:20 by 黄鸟于飞Chao
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 10/500 2026-08-29 16:49 by zICmwzsBXjbN
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 14:13 by jCd0dEvKHShX
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 14:02 by jCd0dEvKHShX
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 13:51 by jCd0dEvKHShX
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-29 11:49 by jCd0dEvKHShX
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 11:40 by jCd0dEvKHShX
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-29 11:18 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +16 爱看书的可乐 2026-08-26 18/900 2026-08-29 10:18 by winsaint
[教师之家] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-29 09:26 by G6APbkg8SA6w
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
请填处理意见