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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » V3区pcr出现非特异性条带怎么办？
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doubleping

新虫 (小有名气)

[求助] V3区pcr出现非特异性条带怎么办？

我用16S的pcr产物扩增V3区，目的片段在250bp左右，但是我扩增出来出现了四条很淡的非特异性条带，大小在1400-300bp之间，不明白这是为什么？给位大神给点意见吧！！！！
我使用体系是2*taq mastermix 15ul,引物 10um/ml  各1ul,模版1ul,ddH2O 12ul，总共30ul，程序是touchdownPCR程序，枪头和水、离心管都是高温灭菌过的，不过没有在超净台和冰上操作。
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1楼2013-07-21 11:02:13
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wubingqi

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-07-21 12:39:52
延伸时间和退火温度是多少？
试试减少一些引物和模版的量
赞一下 回复此楼
2楼2013-07-21 11:48:53
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wubingqi

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by doubleping at 2013-07-21 12:00:11
我用的是touchdownPCR程序，65-55摄氏度，一分钟...

降落pcr没有问题，但是250bp延伸一分钟太长了，最多半分种足够了。我570bp才用40秒。
赞一下 回复此楼
6楼2013-07-22 09:30:45
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