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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 菌液PCR为什么总是没有结果
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uniquethh

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌液PCR为什么总是没有结果 已有6人参与

酶切后的空载质粒板一个菌都没长，实验组长了几十个菌，挑了16个单克隆出来，500ul抗性medium摇菌了1小时后，
菌液PCR体系：1ul的菌液、0.5ul质粒上的前后通用引物， 0.5的Taq酶 ，0.5dNTP , 2ul buffer   加ddw至20ul
菌液PCR条件：95度 5分钟      95度 30秒   58度 30秒  72度2分钟（目的片段是1.8kb）  72度 10分钟   12度  20分钟  
为什么跑胶没有结果，什么都没有P出来？   是不是代表是空载？
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1楼 2015-06-01 16:28:53
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yangjingjing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
随机挑两个出来提质粒看下，在没有的话，只能是假阳性
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努力打败一切
10楼2015-06-04 14:15:19
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普通回帖

晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
第一眼看到是摇菌1小时，会不会太短？菌还没有长起来
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2楼2015-06-01 16:47:18
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lena699

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以试试直接从单克隆直接蘸取一点菌来做菌落PCR
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3楼2015-06-01 18:08:36
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zhang6871

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
直接菌落pcr，不必要菌液pcr
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过于功利，浮躁，布满灰尘的心都是创新的杀手!多记，心静，多动手，贴近大自然!
4楼2015-06-01 18:13:09
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xmcliulei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议直接挑取菌落做PCR验证，同学你摇的时间太短了~
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5楼2015-06-01 23:52:38
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丝状真君

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-02 23:15:16
既然有菌落了，直接把菌落用牙签沾一点，放在10ul无菌水中混匀，以这个菌悬液做模板，直接PCR啊
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6楼2015-06-01 23:59:44
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277795

新虫 (初入文坛)
一个小时也太短了啊  还有预变性可以延长时间  10分钟   使菌液中的DNA更充分的释放出来
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7楼2015-06-02 11:58:44
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uniquethh

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-06-01 16:47:18
第一眼看到是摇菌1小时，会不会太短？菌还没有长起来

实验室里都是这样的。

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8楼2015-06-02 15:58:47
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uniquethh

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 277795 at 2015-06-02 11:58:44
一个小时也太短了啊  还有预变性可以延长时间  10分钟   使菌液中的DNA更充分的释放出来

谢谢

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9楼2015-06-02 16:00:07
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