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qaz139687

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[求助] 有关测序问题，为什么送菌液不直接送PCR产物已有9人参与

做基因的，为什么要割胶回收，连接转化摇菌后送菌液，而不是直接用前面的PCR产物呢

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1楼2015-01-02 13:24:47

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ls2046

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【答案】应助回帖

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qaz139687: 金币+4, ★★★★★最佳答案, 非常有帮助 2015-01-04 16:40:08

在测序的过程中，两端各有20-50bp，是无法准确阅读的，参考性比较低，这是测序技术本身存在的问题，无法避免。连接载体后，使用载体上的序列作为测序引物，那么你的片段就能够读全了（可靠性低的序列会位于在载体上）。如果基因两端的局部序列正确与否对你对结果的判断没有影响的话，完全可以用PCR产物直接测序（测序公司都要的），相反，则需要连接载体并用载体上的引物进行测序。我们做菌种大批量鉴定时都是使用PCR产物直接测序。因此，是连接载体还是用PCR产物，主要是看你测序的目的。ok。