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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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qaz139687

新虫 (小有名气)

[求助] 有关测序问题,为什么送菌液不直接送PCR产物 已有9人参与

做基因的,为什么要割胶回收,连接转化摇菌后送菌液,而不是直接用前面的PCR产物呢
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ls2046

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
qaz139687: 金币+4, ★★★★★最佳答案, 非常有帮助 2015-01-04 16:40:08
在测序的过程中,两端各有20-50bp,是无法准确阅读的,参考性比较低,这是测序技术本身存在的问题,无法避免。连接载体后,使用载体上的序列作为测序引物,那么你的片段就能够读全了(可靠性低的序列会位于在载体上)。如果基因两端的局部序列正确与否对你对结果的判断没有影响的话,完全可以用PCR产物直接测序(测序公司都要的),相反,则需要连接载体并用载体上的引物进行测序。我们做菌种大批量鉴定时都是使用PCR产物直接测序。因此,是连接载体还是用PCR产物,主要是看你测序的目的。ok。
一品黄山
6楼2015-01-04 09:30:22
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普通回帖

冉兆星

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-01-02 18:20:52
PCR产物在后续的操作(割胶回收、连接转化)中可能会发生基因突变。最终我们想要得到的是含有目的基因的菌,所以要用菌液测序。当然你也可以抽菌的质粒测序,但这种方法相对于直接用菌液测序来说费时费力。
2楼2015-01-02 14:39:17
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guoliwang

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
因为转化摇菌后的质粒DNA是重组分子克隆。而PCR产物是细胞外扩增产物,扩增的保真性没有细胞内系统高,即使测序成功,克隆化后还是需要测序的。
慎思明辨博学笃行
3楼2015-01-03 09:48:09
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
菌液是纯化以后的,PCR产物可能有杂带,不好测序!
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
4楼2015-01-03 09:55:07
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qaz139687

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2015-01-03 09:55:07
菌液是纯化以后的,PCR产物可能有杂带,不好测序!

那如果PCR出来的就只有单一的一条带呢 那可以直接送PCR产物吗
5楼2015-01-03 10:38:10
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jingyu501

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

7楼2015-01-04 10:35:06
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zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
pcr product两头测不准
8楼2015-01-04 10:43:08
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alicelchf

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你最后要啥就测啥呗

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
修身、齐家、治国、平天下
9楼2015-01-04 10:50:49
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by qaz139687 at 2015-01-03 10:38:10
那如果PCR出来的就只有单一的一条带呢 那可以直接送PCR产物吗...

觉得不可行,都是目的条带大小的PCR产物也可能是混合物啊,但是连接质粒转化后,每个单克隆连接的都是同一个片段。

[ 发自小木虫客户端 ]
10楼2015-01-04 11:00:45
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