应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于PCR与测序
191/2返回列表12下一页
查看: 1724  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

azad2013

银虫 (初入文坛)

[求助] 关于PCR与测序

最近在做基因克隆与测序，步骤如下：
1.设计简并引物
2.菌液PCR，目的基因割胶回收
3.目的基因与载体连接
4.将载体转化到感受态大肠杆菌
5.Amp平板筛选，将长出的菌落再次做PCR，跑胶看载体是否连入正确的目的基因
6.将连有目的基因的菌液送去测序
我的问题来了：不能将连有目的基因的PCR液送去测序么？如果嫌液体太少，稀释啊，反正PCR完后浓度应该相当大。(PCR使用的是载体的引物进行的，这样送去测序应该不影响目的基因啊)

[ Last edited by azad2013 on 2013-3-4 at 08:23 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-03-04 08:17:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)
你指的哪一步？
菌液PCR那步肯定不能测序的
最后一步也没什么区别了。
赞一下 回复此楼
2楼2013-03-04 08:35:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR的产物是可以拿去测序的，但通常成功率没有质粒测序高，所以不这么做。
赞一下 回复此楼
3楼2013-03-04 09:12:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般测序是在PCR产物测序那步，不过你也可以再你说的第六步进行测序，直接送菌液就可以了，1ml足以。另外你的目的基因连接到载体上，利用载体上的测序引物进行测序是完全没有问题的。
赞一下 回复此楼
生物化学与分子生物学
4楼2013-03-04 10:44:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主我就是做测序出来的，你可以直接把菌液拿给测序公司就行，PCR也可以，质粒也行，收费都一样，楼主考虑吧。
赞一下 回复此楼
5楼2013-03-04 14:39:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

azad2013

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lihuan0525 at 2013-03-04 14:39:00
楼主我就是做测序出来的，你可以直接把菌液拿给测序公司就行，PCR也可以，质粒也行，收费都一样，楼主考虑吧。

但有些说，PCR的只能部分测序?那关于送去溶液的量有什么要求么？
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3427256&page=1
赞一下 回复此楼
6楼2013-03-04 17:16:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

azad2013

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lidonghong at 2013-03-04 10:44:51
一般测序是在PCR产物测序那步，不过你也可以再你说的第六步进行测序，直接送菌液就可以了，1ml足以。另外你的目的基因连接到载体上，利用载体上的测序引物进行测序是完全没有问题的。

那PCR的液体呢，不过它的体系一般就几十微升？
赞一下 回复此楼
7楼2013-03-04 17:17:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by azad2013 at 2013-03-04 17:17:58
那PCR的液体呢，不过它的体系一般就几十微升？...

PCR产物测序25ul也是可以的，50ul足以。
赞一下 回复此楼
生物化学与分子生物学
8楼2013-03-05 08:15:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
pcr可以直接测序的啊，通常会菌液和质粒一起测序
赞一下 回复此楼
让复杂的事情变简单，简单的事情更简单
9楼2013-03-05 10:20:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冷酷的JING

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
切胶后将剩下的PCR液送测，如果测序失败再回收胶做连接转化，省时又双重保险
赞一下 回复此楼
10楼2013-03-06 09:19:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 azad2013 的主题更新
191/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +3 kongweilin 2026-03-26 3/150 2026-03-26 00:53 by 15723253818
[考研] 招08考数学 +8 laoshidan 2026-03-20 17/850 2026-03-25 17:52 by 一个红太阳
[考研] 求调剂 +3 李李不服输 2026-03-25 3/150 2026-03-25 13:03 by cmz0325
[考研] 考研化学308分求调剂 +10 你好明天你好 2026-03-23 11/550 2026-03-25 10:23 by userper
[考研] 一志愿北化315 求调剂 +3 akrrain 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:35 by 了了了了。。
[有机交流] 有机合成求助 20+3 FENGSHUJEI 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:31 by 88817753
[考研] 291求调剂 +3 HanBeiNingZC 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:34 by barlinike
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +4 曼111 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:44 by 星空星月
[考研] 321求调剂 +4 Ymlll 2026-03-24 4/200 2026-03-24 14:44 by sprinining
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 6/300 2026-03-23 21:45 by 子系博
[考研] 298求调剂 +8 上岸6666@ 2026-03-20 8/400 2026-03-23 11:02 by laoshidan
[考研] 291求调剂 +5 孅華 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:20 by haoshis
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 材料与化工085600，总分304，本科有两篇sci参与，求调剂 +4 幸运的酱酱 2026-03-22 5/250 2026-03-22 20:15 by edmund7
[考研] 324求调剂 +6 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 6/300 2026-03-22 16:01 by ColorlessPI
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:12 by 朱芷琳
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:15 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
[考研] 261求B区调剂，科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭