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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于PCR与测序
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azad2013

银虫 (初入文坛)

[求助] 关于PCR与测序

最近在做基因克隆与测序，步骤如下：
1.设计简并引物
2.菌液PCR，目的基因割胶回收
3.目的基因与载体连接
4.将载体转化到感受态大肠杆菌
5.Amp平板筛选，将长出的菌落再次做PCR，跑胶看载体是否连入正确的目的基因
6.将连有目的基因的菌液送去测序
我的问题来了：不能将连有目的基因的PCR液送去测序么？如果嫌液体太少，稀释啊，反正PCR完后浓度应该相当大。(PCR使用的是载体的引物进行的，这样送去测序应该不影响目的基因啊)

[ Last edited by azad2013 on 2013-3-4 at 08:23 ]
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1楼 2013-03-04 08:17:17
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR的产物是可以拿去测序的，但通常成功率没有质粒测序高，所以不这么做。
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3楼2013-03-04 09:12:43
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)
你指的哪一步？
菌液PCR那步肯定不能测序的
最后一步也没什么区别了。
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2楼2013-03-04 08:35:16
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般测序是在PCR产物测序那步，不过你也可以再你说的第六步进行测序，直接送菌液就可以了，1ml足以。另外你的目的基因连接到载体上，利用载体上的测序引物进行测序是完全没有问题的。
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生物化学与分子生物学
4楼2013-03-04 10:44:51
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主我就是做测序出来的，你可以直接把菌液拿给测序公司就行，PCR也可以，质粒也行，收费都一样，楼主考虑吧。
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5楼2013-03-04 14:39:00
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