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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于PCR与测序
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zltj2008

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我没理解错的话，你是想用第5步的PCR反应液去测序？这步的目的是鉴定你的基因是否连载载体上，并且成功的转化到这个菌里，但菌落PCR是有一定的假阳性的(比如你菌落上可能沾有酶连体系)，所以测序确认是要对菌液测序。如果只用PCR去测序，肯定是能测的，但测得的结果没意义，因为你还是不能肯定你载体构建成功并转化到这个菌上了。
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11楼2013-03-06 13:54:13
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老衲问佛

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以去测序，但是浓度还是不够，一般测序不成功，所以最好要做克隆
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各种求
12楼2013-03-19 21:04:10
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hhz0104

金虫 (正式写手)
楼主是说不能用第5步的PCR产物去测序，而要用第6步的菌液测序吗？
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13楼2013-03-20 20:16:53
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zr281069

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

割胶纯化后测序   不行就在做连接
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人物
14楼2013-03-21 08:35:10
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azad2013

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by hhz0104 at 2013-03-20 20:16:53
楼主是说不能用第5步的PCR产物去测序，而要用第6步的菌液测序吗？

是的，用pcr的浓度不是更高么？？
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15楼2013-03-21 19:54:54
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hhz0104

金虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by azad2013 at 2013-03-21 19:54:54
是的，用pcr的浓度不是更高么？？...

可是我之前都是拿克隆后的PCR产物去测序的，难道做错了
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16楼2013-03-21 21:45:17
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azad2013

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by hhz0104 at 2013-03-21 21:45:17
可是我之前都是拿克隆后的PCR产物去测序的，难道做错了...

那公司测出来没？？
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17楼2013-03-22 09:58:13
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hhz0104

金虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by azad2013 at 2013-03-22 09:58:13
那公司测出来没？？...

测出来了，不过峰比较低
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18楼2013-03-22 11:41:29
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qqxs

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

PCR产物可以直接测序，实际上测序公司也是给你纯化以后再测，所以费用高几元钱。但你的情况特殊，因为你用的是兼并引物，所以测序特异性不好，最好是连到载体再测序。
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19楼2013-03-22 12:02:32
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