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zltj2008

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我没理解错的话,你是想用第5步的PCR反应液去测序?这步的目的是鉴定你的基因是否连载载体上,并且成功的转化到这个菌里,但菌落PCR是有一定的假阳性的(比如你菌落上可能沾有酶连体系),所以测序确认是要对菌液测序。如果只用PCR去测序,肯定是能测的,但测得的结果没意义,因为你还是不能肯定你载体构建成功并转化到这个菌上了。
11楼2013-03-06 13:54:13
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老衲问佛

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以去测序,但是浓度还是不够,一般测序不成功,所以最好要做克隆
各种求
12楼2013-03-19 21:04:10
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hhz0104

金虫 (正式写手)

楼主是说不能用第5步的PCR产物去测序,而要用第6步的菌液测序吗?
13楼2013-03-20 20:16:53
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zr281069

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

割胶纯化后测序   不行就在做连接
人物
14楼2013-03-21 08:35:10
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azad2013

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
13楼: Originally posted by hhz0104 at 2013-03-20 20:16:53
楼主是说不能用第5步的PCR产物去测序,而要用第6步的菌液测序吗?

是的,用pcr的浓度不是更高么??
15楼2013-03-21 19:54:54
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hhz0104

金虫 (正式写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by azad2013 at 2013-03-21 19:54:54
是的,用pcr的浓度不是更高么??...

可是我之前都是拿克隆后的PCR产物去测序的,难道做错了
16楼2013-03-21 21:45:17
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azad2013

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
16楼: Originally posted by hhz0104 at 2013-03-21 21:45:17
可是我之前都是拿克隆后的PCR产物去测序的,难道做错了...

那公司测出来没??
17楼2013-03-22 09:58:13
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hhz0104

金虫 (正式写手)

引用回帖:
17楼: Originally posted by azad2013 at 2013-03-22 09:58:13
那公司测出来没??...

测出来了,不过峰比较低
18楼2013-03-22 11:41:29
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qqxs

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

PCR产物可以直接测序,实际上测序公司也是给你纯化以后再测,所以费用高几元钱。但你的情况特殊,因为你用的是兼并引物,所以测序特异性不好,最好是连到载体再测序。
19楼2013-03-22 12:02:32
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