24小时热门版块排行榜    

查看: 1722  |  回复: 18

zltj2008

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我没理解错的话,你是想用第5步的PCR反应液去测序?这步的目的是鉴定你的基因是否连载载体上,并且成功的转化到这个菌里,但菌落PCR是有一定的假阳性的(比如你菌落上可能沾有酶连体系),所以测序确认是要对菌液测序。如果只用PCR去测序,肯定是能测的,但测得的结果没意义,因为你还是不能肯定你载体构建成功并转化到这个菌上了。
11楼2013-03-06 13:54:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

老衲问佛

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以去测序,但是浓度还是不够,一般测序不成功,所以最好要做克隆
各种求
12楼2013-03-19 21:04:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hhz0104

金虫 (正式写手)

楼主是说不能用第5步的PCR产物去测序,而要用第6步的菌液测序吗?
13楼2013-03-20 20:16:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zr281069

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

割胶纯化后测序   不行就在做连接
人物
14楼2013-03-21 08:35:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

azad2013

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
13楼: Originally posted by hhz0104 at 2013-03-20 20:16:53
楼主是说不能用第5步的PCR产物去测序,而要用第6步的菌液测序吗?

是的,用pcr的浓度不是更高么??
15楼2013-03-21 19:54:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hhz0104

金虫 (正式写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by azad2013 at 2013-03-21 19:54:54
是的,用pcr的浓度不是更高么??...

可是我之前都是拿克隆后的PCR产物去测序的,难道做错了
16楼2013-03-21 21:45:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

azad2013

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
16楼: Originally posted by hhz0104 at 2013-03-21 21:45:17
可是我之前都是拿克隆后的PCR产物去测序的,难道做错了...

那公司测出来没??
17楼2013-03-22 09:58:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hhz0104

金虫 (正式写手)

引用回帖:
17楼: Originally posted by azad2013 at 2013-03-22 09:58:13
那公司测出来没??...

测出来了,不过峰比较低
18楼2013-03-22 11:41:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qqxs

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

PCR产物可以直接测序,实际上测序公司也是给你纯化以后再测,所以费用高几元钱。但你的情况特殊,因为你用的是兼并引物,所以测序特异性不好,最好是连到载体再测序。
19楼2013-03-22 12:02:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 azad2013 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 274求调剂 +8 顾九笙要谦虚 2026-03-24 12/600 2026-03-25 20:15 by 20021109
[考研] 求调剂 +3 李李不服输 2026-03-25 3/150 2026-03-25 13:03 by cmz0325
[考研] 081700 调剂 267分 +10 迷人的哈哈 2026-03-23 10/500 2026-03-25 12:12 by userper
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +4 Promise-jyl 2026-03-23 4/200 2026-03-25 11:36 by Sugarlight
[考研] 材料调剂 +3 iwinso 2026-03-23 3/150 2026-03-25 11:29 by greychen00
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +5 谷雨上岸 2026-03-23 6/300 2026-03-24 16:32 by laoshidan
[考研] 321求调剂 +4 Ymlll 2026-03-24 4/200 2026-03-24 14:44 by sprinining
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +7 vv迷 2026-03-22 7/350 2026-03-23 23:44 by Txy@872106
[考研] 284求调剂 +3 yanzhixue111 2026-03-23 6/300 2026-03-23 22:58 by pswait
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 6/300 2026-03-23 21:45 by 子系博
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境,总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
[考研] 求调剂材料学硕080500,总分289分 5+3 @taotao 2026-03-19 21/1050 2026-03-23 10:17 by 冠c哥
[考研] 317求调剂 +12 申子申申 2026-03-19 18/900 2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 初试 317 +7 半拉月丙 2026-03-20 7/350 2026-03-21 22:26 by peike
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +9 Doleres 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:36 by JourneyLucky
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见