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快乐农夫

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★
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qaz139687: 金币+1, ★★★很有帮助 2015-01-04 16:35:16

谁说不可以啊，直接送pcr产物叫pcr未纯化，切胶回收就是pcr已纯化，都可以用来测序，公司的测序单上都有样品类型供选择的，一般是四个类型，除了上面两个还有菌液和质粒

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11楼2015-01-04 11:03:26

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582615417

木虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

pcr产物也可以直接送，我们测序就直接送pcr产物

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12楼2015-01-04 11:18:51

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打盹的毛毛虫

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

1. 测序如果只是为了看一下这个片段是什么，不需要精度要求，那么送PCR产物完全没问题
2. 如果是为了对目的基因进行下一步操作 e.g.基因融合or片段连接，那么为了保险起见要送单克隆测序。主要原因是因为PCR产物是一种混合物：即使高保真酶也不能完全避碱基的错误扩增。尽管你PCR测序正确，但是在下一步连接时仍然有可能连接一个错误片段。

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13楼2015-01-04 11:38:34

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qaz139687

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引用回帖:

13楼: Originally posted by 打盹的毛毛虫 at 2015-01-04 11:38:34
1. 测序如果只是为了看一下这个片段是什么，不需要精度要求，那么送PCR产物完全没问题
2. 如果是为了对目的基因进行下一步操作 e.g.基因融合or片段连接，那么为了保险起见要送单克隆测序。主要原因是因为PCR产物是 ...

我的是在转录组里面找到这个基因的片段，如果看下这个片段是我要的目的基因，那我是不是可以直接用转录组里的序列设计引物拉全长呢？如果不行，那么我测的这个片段后续要拿来拉全长用，那么是不是要精确测序？

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14楼2015-01-04 16:38:18

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qaz139687

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引用回帖:

6楼: Originally posted by ls2046 at 2015-01-04 09:30:22
在测序的过程中，两端各有20-50bp，是无法准确阅读的，参考性比较低，这是测序技术本身存在的问题，无法避免。连接载体后，使用载体上的序列作为测序引物，那么你的片段就能够读全了（可靠性低的序列会位于在载体上 ...

另外大神有没有QQ什么的，能不能加你QQ问些问题呢

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15楼2015-01-04 16:40:34

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