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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关测序问题，为什么送菌液不直接送PCR产物
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快乐农夫

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
qaz139687: 金币+1, ★★★很有帮助 2015-01-04 16:35:16
谁说不可以啊，直接送pcr产物叫pcr未纯化，切胶回收就是pcr已纯化，都可以用来测序，公司的测序单上都有样品类型供选择的，一般是四个类型，除了上面两个还有菌液和质粒

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11楼2015-01-04 11:03:26
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582615417

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
pcr产物也可以直接送，我们测序就直接送pcr产物

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12楼2015-01-04 11:18:51
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打盹的毛毛虫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1. 测序如果只是为了看一下这个片段是什么，不需要精度要求，那么送PCR产物完全没问题
2. 如果是为了对目的基因进行下一步操作 e.g.基因融合or片段连接，那么为了保险起见要送单克隆测序。主要原因是因为PCR产物是一种混合物：即使高保真酶也不能完全避碱基的错误扩增。尽管你PCR测序正确，但是在下一步连接时仍然有可能连接一个错误片段。
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13楼2015-01-04 11:38:34
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qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 打盹的毛毛虫 at 2015-01-04 11:38:34
1. 测序如果只是为了看一下这个片段是什么，不需要精度要求，那么送PCR产物完全没问题
2. 如果是为了对目的基因进行下一步操作 e.g.基因融合or片段连接，那么为了保险起见要送单克隆测序。主要原因是因为PCR产物是 ...

我的是在转录组里面找到这个基因的片段，如果看下这个片段是我要的目的基因，那我是不是可以直接用转录组里的序列设计引物拉全长呢？如果不行，那么我测的这个片段后续要拿来拉全长用，那么是不是要精确测序？
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14楼2015-01-04 16:38:18
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qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by ls2046 at 2015-01-04 09:30:22
在测序的过程中，两端各有20-50bp，是无法准确阅读的，参考性比较低，这是测序技术本身存在的问题，无法避免。连接载体后，使用载体上的序列作为测序引物，那么你的片段就能够读全了（可靠性低的序列会位于在载体上 ...

另外大神有没有QQ什么的，能不能加你QQ问些问题呢
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15楼2015-01-04 16:40:34
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ls2046

铁杆木虫 (职业作家)
内容已删除
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一品黄山
16楼2015-01-05 09:00:20
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lu12306

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by qaz139687 at 2015-01-03 10:38:10
那如果PCR出来的就只有单一的一条带呢 那可以直接送PCR产物吗...

如果大小符合，可以送去测序。但是要求浓度得高。测一个反应的话，50微升足矣。如果想测多个反应，最好多送点PCR产物，免得以后测序部还要求你再寄过去。
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17楼2015-01-05 11:58:34
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781055707

木虫 (著名写手)
菌夜测序的话，对不同的质粒有对应的通用引物。PCR产物也可以测序，你给他们你的引物就可以了。现在的一二代测序都需要引物才能测序的。
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采菊东篱下，悠然见南山。
18楼2015-01-06 10:47:36
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骆驼人

金虫 (正式写手)
我最近准备送一批PCR原液送去测序，实验目的是比对一下不同材料间的序列差异，如果是这个目的的话，是不是应该送菌液测序呢？
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愿你，温柔又坚定，不轻易许诺但许的诺一定会实现，有勇气有力量，会发现一切美好的事物
19楼2015-04-10 20:20:36
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