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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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快乐农夫

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
qaz139687: 金币+1, ★★★很有帮助 2015-01-04 16:35:16
谁说不可以啊,直接送pcr产物叫pcr未纯化,切胶回收就是pcr已纯化,都可以用来测序,公司的测序单上都有样品类型供选择的,一般是四个类型,除了上面两个还有菌液和质粒

[ 发自小木虫客户端 ]
11楼2015-01-04 11:03:26
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582615417

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
pcr产物也可以直接送,我们测序就直接送pcr产物

[ 发自小木虫客户端 ]
12楼2015-01-04 11:18:51
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打盹的毛毛虫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1. 测序如果只是为了看一下这个片段是什么,不需要精度要求,那么送PCR产物完全没问题
2. 如果是为了对目的基因进行下一步操作 e.g.基因融合or片段连接,那么为了保险起见要送单克隆测序。主要原因是因为PCR产物是一种混合物:即使高保真酶也不能完全避碱基的错误扩增。尽管你PCR测序正确,但是在下一步连接时仍然有可能连接一个错误片段。
13楼2015-01-04 11:38:34
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qaz139687

新虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 打盹的毛毛虫 at 2015-01-04 11:38:34
1. 测序如果只是为了看一下这个片段是什么,不需要精度要求,那么送PCR产物完全没问题
2. 如果是为了对目的基因进行下一步操作 e.g.基因融合or片段连接,那么为了保险起见要送单克隆测序。主要原因是因为PCR产物是 ...

我的是在转录组里面找到这个基因的片段,如果看下这个片段是我要的目的基因,那我是不是可以直接用转录组里的序列设计引物拉全长呢?如果不行,那么我测的这个片段后续要拿来拉全长用,那么是不是要精确测序?
14楼2015-01-04 16:38:18
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qaz139687

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by ls2046 at 2015-01-04 09:30:22
在测序的过程中,两端各有20-50bp,是无法准确阅读的,参考性比较低,这是测序技术本身存在的问题,无法避免。连接载体后,使用载体上的序列作为测序引物,那么你的片段就能够读全了(可靠性低的序列会位于在载体上 ...

另外大神有没有QQ什么的,能不能加你QQ问些问题呢
15楼2015-01-04 16:40:34
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ls2046

铁杆木虫 (职业作家)

内容已删除
一品黄山
16楼2015-01-05 09:00:20
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lu12306

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by qaz139687 at 2015-01-03 10:38:10
那如果PCR出来的就只有单一的一条带呢 那可以直接送PCR产物吗...

如果大小符合,可以送去测序。但是要求浓度得高。测一个反应的话,50微升足矣。如果想测多个反应,最好多送点PCR产物,免得以后测序部还要求你再寄过去。
17楼2015-01-05 11:58:34
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781055707

木虫 (著名写手)

菌夜测序的话,对不同的质粒有对应的通用引物。PCR产物也可以测序,你给他们你的引物就可以了。现在的一二代测序都需要引物才能测序的。
采菊东篱下,悠然见南山。
18楼2015-01-06 10:47:36
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骆驼人

金虫 (正式写手)

我最近准备送一批PCR原液送去测序,实验目的是比对一下不同材料间的序列差异,如果是这个目的的话,是不是应该送菌液测序呢?
愿你,温柔又坚定,不轻易许诺但许的诺一定会实现,有勇气有力量,会发现一切美好的事物
19楼2015-04-10 20:20:36
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