24小时热门版块排行榜    

查看: 3871  |  回复: 18

快乐农夫

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
qaz139687: 金币+1, ★★★很有帮助 2015-01-04 16:35:16
谁说不可以啊,直接送pcr产物叫pcr未纯化,切胶回收就是pcr已纯化,都可以用来测序,公司的测序单上都有样品类型供选择的,一般是四个类型,除了上面两个还有菌液和质粒

[ 发自小木虫客户端 ]
11楼2015-01-04 11:03:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

582615417

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
pcr产物也可以直接送,我们测序就直接送pcr产物

[ 发自小木虫客户端 ]
12楼2015-01-04 11:18:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

打盹的毛毛虫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1. 测序如果只是为了看一下这个片段是什么,不需要精度要求,那么送PCR产物完全没问题
2. 如果是为了对目的基因进行下一步操作 e.g.基因融合or片段连接,那么为了保险起见要送单克隆测序。主要原因是因为PCR产物是一种混合物:即使高保真酶也不能完全避碱基的错误扩增。尽管你PCR测序正确,但是在下一步连接时仍然有可能连接一个错误片段。
13楼2015-01-04 11:38:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 打盹的毛毛虫 at 2015-01-04 11:38:34
1. 测序如果只是为了看一下这个片段是什么,不需要精度要求,那么送PCR产物完全没问题
2. 如果是为了对目的基因进行下一步操作 e.g.基因融合or片段连接,那么为了保险起见要送单克隆测序。主要原因是因为PCR产物是 ...

我的是在转录组里面找到这个基因的片段,如果看下这个片段是我要的目的基因,那我是不是可以直接用转录组里的序列设计引物拉全长呢?如果不行,那么我测的这个片段后续要拿来拉全长用,那么是不是要精确测序?
14楼2015-01-04 16:38:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by ls2046 at 2015-01-04 09:30:22
在测序的过程中,两端各有20-50bp,是无法准确阅读的,参考性比较低,这是测序技术本身存在的问题,无法避免。连接载体后,使用载体上的序列作为测序引物,那么你的片段就能够读全了(可靠性低的序列会位于在载体上 ...

另外大神有没有QQ什么的,能不能加你QQ问些问题呢
15楼2015-01-04 16:40:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ls2046

铁杆木虫 (职业作家)

内容已删除
一品黄山
16楼2015-01-05 09:00:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lu12306

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by qaz139687 at 2015-01-03 10:38:10
那如果PCR出来的就只有单一的一条带呢 那可以直接送PCR产物吗...

如果大小符合,可以送去测序。但是要求浓度得高。测一个反应的话,50微升足矣。如果想测多个反应,最好多送点PCR产物,免得以后测序部还要求你再寄过去。
17楼2015-01-05 11:58:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)

菌夜测序的话,对不同的质粒有对应的通用引物。PCR产物也可以测序,你给他们你的引物就可以了。现在的一二代测序都需要引物才能测序的。
采菊东篱下,悠然见南山。
18楼2015-01-06 10:47:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

骆驼人

金虫 (正式写手)

我最近准备送一批PCR原液送去测序,实验目的是比对一下不同材料间的序列差异,如果是这个目的的话,是不是应该送菌液测序呢?
愿你,温柔又坚定,不轻易许诺但许的诺一定会实现,有勇气有力量,会发现一切美好的事物
19楼2015-04-10 20:20:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qaz139687 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 284求调剂 +8 天下熯 2026-02-28 8/400 2026-03-02 00:15 by 暮雨星晴
[基金申请] 本子写完了,给DS兄弟看了,得了92分 +3 Doma 2026-03-01 7/350 2026-03-02 00:00 by jnzsy
[考研] 求调剂 +5 yunziaaaaa 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:57 by ccp273206157
[考研] 材料学硕318求调剂 +11 February_Feb 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:53 by ccp273206157
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:31 by L135790
[考研] 275求调剂 +3 明远求学 2026-03-01 3/150 2026-03-01 22:29 by 刘兵
[考研] 0856求调剂285 +10 吕仔龙 2026-02-28 10/500 2026-03-01 21:37 by 公瑾逍遥
[考研] 274求调剂 +3 cgyzqwn 2026-03-01 6/300 2026-03-01 21:24 by cgyzqwn
[考研] 0805总分292,求调剂 +7 幻想之殇 2026-03-01 7/350 2026-03-01 21:22 by 公瑾逍遥
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
请填处理意见