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有关测序问题,为什么送菌液不直接送PCR产物
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qaz139687
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有关测序问题,为什么送菌液不直接送PCR产物
已有9人参与
做基因的,为什么要割胶回收,连接转化摇菌后送菌液,而不是直接用前面的PCR产物呢
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1楼
2015-01-02 13:24:47
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qaz139687
新虫
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13楼
:
Originally posted by
打盹的毛毛虫
at 2015-01-04 11:38:34
1. 测序如果只是为了看一下这个片段是什么,不需要精度要求,那么送PCR产物完全没问题
2. 如果是为了对目的基因进行下一步操作 e.g.基因融合or片段连接,那么为了保险起见要送单克隆测序。主要原因是因为PCR产物是 ...
我的是在转录组里面找到这个基因的片段,如果看下这个片段是我要的目的基因,那我是不是可以直接用转录组里的序列设计引物拉全长呢?如果不行,那么我测的这个片段后续要拿来拉全长用,那么是不是要精确测序?
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14楼
2015-01-04 16:38:18
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冉兆星
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专业: 植物学
【答案】应助回帖
★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流
2015-01-02 18:20:52
PCR产物在后续的操作(割胶回收、连接转化)中可能会发生基因突变。最终我们想要得到的是含有目的基因的菌,所以要用菌液测序。当然你也可以抽菌的质粒测序,但这种方法相对于直接用菌液测序来说费时费力。
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2楼
2015-01-02 14:39:17
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guoliwang
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专业: 生物化学
【答案】应助回帖
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因为转化摇菌后的质粒DNA是重组分子克隆。而PCR产物是细胞外扩增产物,扩增的保真性没有细胞内系统高,即使测序成功,克隆化后还是需要测序的。
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慎思明辨博学笃行
3楼
2015-01-03 09:48:09
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【答案】应助回帖
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菌液是纯化以后的,PCR产物可能有杂带,不好测序!
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人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
4楼
2015-01-03 09:55:07
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