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qaz139687

新虫 (小有名气)

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[求助] 有关测序问题，为什么送菌液不直接送PCR产物已有9人参与

做基因的，为什么要割胶回收，连接转化摇菌后送菌液，而不是直接用前面的PCR产物呢

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1楼2015-01-02 13:24:47

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打盹的毛毛虫

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

1. 测序如果只是为了看一下这个片段是什么，不需要精度要求，那么送PCR产物完全没问题
2. 如果是为了对目的基因进行下一步操作 e.g.基因融合or片段连接，那么为了保险起见要送单克隆测序。主要原因是因为PCR产物是一种混合物：即使高保真酶也不能完全避碱基的错误扩增。尽管你PCR测序正确，但是在下一步连接时仍然有可能连接一个错误片段。