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qaz139687

新虫 (小有名气)

[求助] 有关测序问题,为什么送菌液不直接送PCR产物已有9人参与

做基因的,为什么要割胶回收,连接转化摇菌后送菌液,而不是直接用前面的PCR产物呢
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qaz139687

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by ls2046 at 2015-01-04 09:30:22
在测序的过程中,两端各有20-50bp,是无法准确阅读的,参考性比较低,这是测序技术本身存在的问题,无法避免。连接载体后,使用载体上的序列作为测序引物,那么你的片段就能够读全了(可靠性低的序列会位于在载体上 ...

另外大神有没有QQ什么的,能不能加你QQ问些问题呢
15楼2015-01-04 16:40:34
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查看全部 19 个回答

冉兆星

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-01-02 18:20:52
PCR产物在后续的操作(割胶回收、连接转化)中可能会发生基因突变。最终我们想要得到的是含有目的基因的菌,所以要用菌液测序。当然你也可以抽菌的质粒测序,但这种方法相对于直接用菌液测序来说费时费力。
2楼2015-01-02 14:39:17
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guoliwang

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
因为转化摇菌后的质粒DNA是重组分子克隆。而PCR产物是细胞外扩增产物,扩增的保真性没有细胞内系统高,即使测序成功,克隆化后还是需要测序的。
慎思明辨博学笃行
3楼2015-01-03 09:48:09
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
菌液是纯化以后的,PCR产物可能有杂带,不好测序!
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
4楼2015-01-03 09:55:07
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