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uniquethh

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌液PCR为什么总是没有结果 已有6人参与

酶切后的空载质粒板一个菌都没长,实验组长了几十个菌,挑了16个单克隆出来,500ul抗性medium摇菌了1小时后,
菌液PCR体系:1ul的菌液、0.5ul质粒上的前后通用引物, 0.5的Taq酶 ,0.5dNTP , 2ul buffer   加ddw至20ul
菌液PCR条件:95度 5分钟      95度 30秒   58度 30秒  72度2分钟(目的片段是1.8kb)  72度 10分钟   12度  20分钟  
为什么跑胶没有结果,什么都没有P出来?   是不是代表是空载?
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丝状真君

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-02 23:15:16
既然有菌落了,直接把菌落用牙签沾一点,放在10ul无菌水中混匀,以这个菌悬液做模板,直接PCR啊
6楼2015-06-01 23:59:44
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
第一眼看到是摇菌1小时,会不会太短?菌还没有长起来
2楼2015-06-01 16:47:18
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lena699

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以试试直接从单克隆直接蘸取一点菌来做菌落PCR
3楼2015-06-01 18:08:36
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zhang6871

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
直接菌落pcr,不必要菌液pcr
过于功利,浮躁,布满灰尘的心都是创新的杀手!多记,心静,多动手,贴近大自然!
4楼2015-06-01 18:13:09
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