应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 菌液PCR为什么总是没有结果
121/2返回列表12下一页
查看: 2538  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

uniquethh

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌液PCR为什么总是没有结果 已有6人参与

酶切后的空载质粒板一个菌都没长，实验组长了几十个菌，挑了16个单克隆出来，500ul抗性medium摇菌了1小时后，
菌液PCR体系：1ul的菌液、0.5ul质粒上的前后通用引物， 0.5的Taq酶 ，0.5dNTP , 2ul buffer   加ddw至20ul
菌液PCR条件：95度 5分钟      95度 30秒   58度 30秒  72度2分钟（目的片段是1.8kb）  72度 10分钟   12度  20分钟  
为什么跑胶没有结果，什么都没有P出来？   是不是代表是空载？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-06-01 16:28:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yangjingjing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
随机挑两个出来提质粒看下，在没有的话，只能是假阳性
赞一下(1人) 回复此楼
努力打败一切
10楼2015-06-04 14:15:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
第一眼看到是摇菌1小时，会不会太短？菌还没有长起来
赞一下 回复此楼
2楼2015-06-01 16:47:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lena699

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以试试直接从单克隆直接蘸取一点菌来做菌落PCR
赞一下 回复此楼
3楼2015-06-01 18:08:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang6871

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
直接菌落pcr，不必要菌液pcr
赞一下 回复此楼
过于功利，浮躁，布满灰尘的心都是创新的杀手!多记，心静，多动手，贴近大自然!
4楼2015-06-01 18:13:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xmcliulei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议直接挑取菌落做PCR验证，同学你摇的时间太短了~
赞一下 回复此楼
5楼2015-06-01 23:52:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丝状真君

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-02 23:15:16
既然有菌落了，直接把菌落用牙签沾一点，放在10ul无菌水中混匀，以这个菌悬液做模板，直接PCR啊
赞一下 回复此楼
6楼2015-06-01 23:59:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

277795

新虫 (初入文坛)
一个小时也太短了啊  还有预变性可以延长时间  10分钟   使菌液中的DNA更充分的释放出来
赞一下 回复此楼
7楼2015-06-02 11:58:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

uniquethh

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-06-01 16:47:18
第一眼看到是摇菌1小时，会不会太短？菌还没有长起来

实验室里都是这样的。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
8楼2015-06-02 15:58:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

uniquethh

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 277795 at 2015-06-02 11:58:44
一个小时也太短了啊  还有预变性可以延长时间  10分钟   使菌液中的DNA更充分的释放出来

谢谢

[ 发自小木虫客户端 ]
回复此楼
9楼2015-06-02 16:00:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 uniquethh 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 网络空间安全0839招调剂 +3 w320357296 2026-03-25 5/250 2026-03-25 15:31 by w320357296
[考研] 274求调剂 +7 顾九笙要谦虚 2026-03-24 7/350 2026-03-25 15:18 by baoball
[考研] 085600 材料与化工 329分求调剂 +3 Mr. Z 2026-03-25 3/150 2026-03-25 15:06 by Linda Hu
[考研] 材料与化工考研调剂 +9 孅華 2026-03-22 9/450 2026-03-25 13:09 by cmz0325
[考研] 303求调剂 +6 元夕元 2026-03-20 7/350 2026-03-25 12:00 by edmund7
[考研] 求调剂323材料与化工 +4 1124361 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:19 by shulmg
[考研] 299求调剂 +7 shxchem 2026-03-20 9/450 2026-03-25 10:41 by lbsjt
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +4 13831862839 2026-03-24 5/250 2026-03-25 09:47 by 无际的草原
[考研] 318求调剂 +5 plum李子 2026-03-21 8/400 2026-03-25 09:26 by aa331100
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 6/300 2026-03-24 15:03 by 余意卿
[考研] 277分求调剂，跨调材料 +3 考研调剂lxh 2026-03-24 3/150 2026-03-24 13:52 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华东理工大学081700，初试分数271 +5 kotoko_ik 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:29 by 学术搬砖er
[考研] 一志愿国科过程所081700，274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境，总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 333求调剂 +3 ALULU4408 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:04 by macy2011
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[考研] 考研调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
[考研] 22 350 本科985求调剂，求老登收留 +3 李轶男003 2026-03-20 3/150 2026-03-21 13:28 by 搏击518
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭