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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 菌液PCR为什么总是没有结果
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uniquethh

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌液PCR为什么总是没有结果 已有6人参与

酶切后的空载质粒板一个菌都没长，实验组长了几十个菌，挑了16个单克隆出来，500ul抗性medium摇菌了1小时后，
菌液PCR体系：1ul的菌液、0.5ul质粒上的前后通用引物， 0.5的Taq酶 ，0.5dNTP , 2ul buffer   加ddw至20ul
菌液PCR条件：95度 5分钟      95度 30秒   58度 30秒  72度2分钟（目的片段是1.8kb）  72度 10分钟   12度  20分钟  
为什么跑胶没有结果，什么都没有P出来？   是不是代表是空载？
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1楼 2015-06-01 16:28:53
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xmcliulei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议直接挑取菌落做PCR验证，同学你摇的时间太短了~
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5楼2015-06-01 23:52:38
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
第一眼看到是摇菌1小时，会不会太短？菌还没有长起来
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2楼2015-06-01 16:47:18
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lena699

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以试试直接从单克隆直接蘸取一点菌来做菌落PCR
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3楼2015-06-01 18:08:36
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zhang6871

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
直接菌落pcr，不必要菌液pcr
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过于功利，浮躁，布满灰尘的心都是创新的杀手!多记，心静，多动手，贴近大自然!
4楼2015-06-01 18:13:09
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