应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关于质粒双酶切
161/2返回列表12下一页
查看: 1689  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

liuwukang

新虫 (小有名气)

[交流] 关于质粒双酶切 已有8人参与

请问各位师兄师姐，
1.酶切时你们是水浴加热还是用PCR仪保温？
2.之前酶切的效果不好，我切了6个小时，现在可不可以延长，比如12小时过夜？会不会使DNA讲解了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-12-08 10:51:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

guoliwang

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-12-08 16:27:38
一般用金属浴(heating block)，比较方便。当然水浴的温度控制会更好。一般的酶最适条件1- 2小时足够，时间过长容易产生非特异酶切。如果两个酶的最适条件不一致造成酶切不成功，可以分两次酶切，第一次酶切产物纯化后再在最适条件进行第二次酶切。
赞一下(1人) 回复此楼
慎思明辨博学笃行
4楼2014-12-08 12:59:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gangnoon

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-12-10 20:07:29
酶切的问题，一是看选用哪家公司的酶，二是你是单酶切还是双酶切；三是双酶切的效率和星活性如何，用的什么Buffer；一般快酶buffer统一的；其余公司的不一样的公司酶不一样，NEB的酶是全世界最好的酶，但是贵。水浴金属浴都可以，主要是你的仪器要控温OKay。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2014-12-08 17:58:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你用什么酶，体系怎样？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2014-12-08 11:06:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

林家女孩

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们以前是用37℃水浴酶切，有过夜
赞一下 回复此楼
3楼2014-12-08 11:11:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wpwupingwp

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
过夜切过 没啥问题 用的takara的XhoI SphI
赞一下 回复此楼
南无观世音菩萨
5楼2014-12-08 15:58:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuwukang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wpwupingwp at 2014-12-08 15:58:13
过夜切过 没啥问题 用的takara的XhoI SphI

我用的也是takara的酶，两种酶的buffer完全不同，坑死，想着也只有延长时间了，之前试过增加酶量效果一般

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
6楼2014-12-08 16:12:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cckk_2000

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
其实三十七度酶切一个小时效果也非常好。
赞一下 回复此楼
科研炮灰
7楼2014-12-08 17:09:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuwukang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cckk_2000 at 2014-12-08 17:09:41
其实三十七度酶切一个小时效果也非常好。

这么快？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼
9楼2014-12-08 18:34:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuwukang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by gangnoon at 2014-12-08 17:58:46
酶切的问题，一是看选用哪家公司的酶，二是你是单酶切还是双酶切；三是双酶切的效率和星活性如何，用的什么Buffer；一般快酶buffer统一的；其余公司的不一样的公司酶不一样，NEB的酶是全世界最好的酶，但是贵。水浴 ...

takara的酶，双酶切，在表上查到的双酶切buffer对应的两种酶活性都不怎么样，所以很捉鸡啊

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
10楼2014-12-08 18:35:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liuwukang 的主题更新
161/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分，求调剂 +5 wsl111 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:45 by 暮雨星晴
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:31 by L135790
[考研] 0854复试调剂 276 +3 wmm9 2026-03-01 3/150 2026-03-01 23:13 by 热情沙漠
[硕博家园] 博士自荐 +7 科研狗111 2026-02-26 11/550 2026-03-01 22:24 by 哲平L
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 0856求调剂285 +10 吕仔龙 2026-02-28 10/500 2026-03-01 21:37 by 公瑾逍遥
[考研] 274求调剂 +3 cgyzqwn 2026-03-01 6/300 2026-03-01 21:24 by cgyzqwn
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 12/600 2026-03-01 19:48 by 好好好1233
[考研] 306分材料调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无际的草原
[考博] 26申博 +4 想申博！ 2026-02-26 6/300 2026-03-01 17:32 by 想申博！
[考研] 290求调剂 +9 材料专硕调剂； 2026-02-28 11/550 2026-03-01 17:21 by sunny81
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭