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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 有关双酶切时间及质粒添加量的确定
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蓝色泡沫321

银虫 (初入文坛)

[求助] 有关双酶切时间及质粒添加量的确定已有3人参与

我用的thermo 的fastdigest进行双酶切，说明书上说5-10分钟就可以完成酶切，会不会时间太短了呀，有没有人用过这种酶，介绍下经验吧，还有质粒的添加量该怎么确定呢？
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1楼2014-07-04 09:36:52
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zyyyyyyy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-04 23:21:32
按照说明书上操作，如果觉得不放心，酶切时间稍稍长一点也没什么大影响。质粒的添加量要看你的体系是多大的啦
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2楼2014-07-04 10:42:48
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pudding9696

无虫 (小有名气)
楼主参考下这个 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=7467723&fpage=1
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3楼2014-07-04 14:14:47
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蓝色泡沫321

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zyyyyyyy at 2014-07-04 10:42:48
按照说明书上操作，如果觉得不放心，酶切时间稍稍长一点也没什么大影响。质粒的添加量要看你的体系是多大的啦

谢谢
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4楼2014-07-04 14:23:11
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蓝色泡沫321

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by pudding9696 at 2014-07-04 14:14:47
楼主参考下这个 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=7467723&fpage=1

谢谢
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5楼2014-07-04 14:24:28
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gangnoon

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

个人建议，详细认真的阅读产品说明书。按照说明书操作，可以确定质粒的添加量，但你的质粒浓度要测准，可以稍微少加一点，如果胶回收，多做几管。
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6楼2014-12-08 18:13:51
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cckk_2000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

质粒如果是载体的话，建议双酶切的时候量少一些。你抽提质粒之后不是要测浓度吗，根据浓度确定大概1-2ug质粒双酶切即可。时间可以适当延长，主要是时间过长可以引起星号活性，所以你应该好好看看说明书。
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科研炮灰
7楼2014-12-09 09:08:57
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