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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关于质粒双酶切
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liuwukang

新虫 (小有名气)

[交流] 关于质粒双酶切 已有8人参与

请问各位师兄师姐，
1.酶切时你们是水浴加热还是用PCR仪保温？
2.之前酶切的效果不好，我切了6个小时，现在可不可以延长，比如12小时过夜？会不会使DNA讲解了

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1楼 2014-12-08 10:51:10
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

guoliwang

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-12-08 16:27:38
一般用金属浴(heating block)，比较方便。当然水浴的温度控制会更好。一般的酶最适条件1- 2小时足够，时间过长容易产生非特异酶切。如果两个酶的最适条件不一致造成酶切不成功，可以分两次酶切，第一次酶切产物纯化后再在最适条件进行第二次酶切。
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慎思明辨博学笃行
4楼2014-12-08 12:59:58
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gangnoon

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-12-10 20:07:29
酶切的问题，一是看选用哪家公司的酶，二是你是单酶切还是双酶切；三是双酶切的效率和星活性如何，用的什么Buffer；一般快酶buffer统一的；其余公司的不一样的公司酶不一样，NEB的酶是全世界最好的酶，但是贵。水浴金属浴都可以，主要是你的仪器要控温OKay。
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8楼2014-12-08 17:58:46
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普通回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你用什么酶，体系怎样？

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2楼2014-12-08 11:06:25
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林家女孩

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们以前是用37℃水浴酶切，有过夜
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3楼2014-12-08 11:11:05
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wpwupingwp

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
过夜切过 没啥问题 用的takara的XhoI SphI
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南无观世音菩萨
5楼2014-12-08 15:58:13
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liuwukang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wpwupingwp at 2014-12-08 15:58:13
过夜切过 没啥问题 用的takara的XhoI SphI

我用的也是takara的酶，两种酶的buffer完全不同，坑死，想着也只有延长时间了，之前试过增加酶量效果一般

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6楼2014-12-08 16:12:25
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cckk_2000

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
其实三十七度酶切一个小时效果也非常好。
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科研炮灰
7楼2014-12-08 17:09:41
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liuwukang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cckk_2000 at 2014-12-08 17:09:41
其实三十七度酶切一个小时效果也非常好。

这么快？

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9楼2014-12-08 18:34:28
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liuwukang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by gangnoon at 2014-12-08 17:58:46
酶切的问题，一是看选用哪家公司的酶，二是你是单酶切还是双酶切；三是双酶切的效率和星活性如何，用的什么Buffer；一般快酶buffer统一的；其余公司的不一样的公司酶不一样，NEB的酶是全世界最好的酶，但是贵。水浴 ...

takara的酶，双酶切，在表上查到的双酶切buffer对应的两种酶活性都不怎么样，所以很捉鸡啊

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10楼2014-12-08 18:35:48
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