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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关于质粒双酶切
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liuwukang

新虫 (小有名气)

[交流] 关于质粒双酶切 已有8人参与

请问各位师兄师姐，
1.酶切时你们是水浴加热还是用PCR仪保温？
2.之前酶切的效果不好，我切了6个小时，现在可不可以延长，比如12小时过夜？会不会使DNA讲解了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2014-12-08 10:51:10
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gangnoon

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-12-10 20:07:29
酶切的问题，一是看选用哪家公司的酶，二是你是单酶切还是双酶切；三是双酶切的效率和星活性如何，用的什么Buffer；一般快酶buffer统一的；其余公司的不一样的公司酶不一样，NEB的酶是全世界最好的酶，但是贵。水浴金属浴都可以，主要是你的仪器要控温OKay。
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8楼2014-12-08 17:58:46
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Neo2000

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你用什么酶，体系怎样？

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-12-08 11:06:25
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林家女孩

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们以前是用37℃水浴酶切，有过夜
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3楼2014-12-08 11:11:05
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guoliwang

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-12-08 16:27:38
一般用金属浴(heating block)，比较方便。当然水浴的温度控制会更好。一般的酶最适条件1- 2小时足够，时间过长容易产生非特异酶切。如果两个酶的最适条件不一致造成酶切不成功，可以分两次酶切，第一次酶切产物纯化后再在最适条件进行第二次酶切。
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慎思明辨博学笃行
4楼2014-12-08 12:59:58
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