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liuwukang

新虫 (小有名气)

[交流] 关于质粒双酶切 已有8人参与

请问各位师兄师姐,
1.酶切时你们是水浴加热还是用PCR仪保温?
2.之前酶切的效果不好,我切了6个小时,现在可不可以延长,比如12小时过夜?会不会使DNA讲解了

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liuwukang

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by gangnoon at 2014-12-08 17:58:46
酶切的问题,一是看选用哪家公司的酶,二是你是单酶切还是双酶切;三是双酶切的效率和星活性如何,用的什么Buffer;一般快酶buffer统一的;其余公司的不一样的公司酶不一样,NEB的酶是全世界最好的酶,但是贵。水浴 ...

takara的酶,双酶切,在表上查到的双酶切buffer对应的两种酶活性都不怎么样,所以很捉鸡啊

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
10楼2014-12-08 18:35:48
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Neo2000

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你用什么酶,体系怎样?

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-12-08 11:06:25
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林家女孩

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我们以前是用37℃水浴酶切,有过夜
3楼2014-12-08 11:11:05
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guoliwang

至尊木虫 (职业作家)

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-12-08 16:27:38
一般用金属浴(heating block),比较方便。当然水浴的温度控制会更好。一般的酶最适条件1- 2小时足够,时间过长容易产生非特异酶切。如果两个酶的最适条件不一致造成酶切不成功,可以分两次酶切,第一次酶切产物纯化后再在最适条件进行第二次酶切。
慎思明辨博学笃行
4楼2014-12-08 12:59:58
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