24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1745  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

Lopick

新虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切得到的500bp的片段回收效果不好,是怎么个情况? 已有6人参与

我的质粒全长3000多bp   双酶切后得到2000bp和500bp两个片段  可是前者亮度较好  后者亮度较浅    要回收500bp  可是回收后跑胶没条带   请问各位大神  这是神马情况啊???

双酶切得到的500bp的片段回收效果不好,是怎么个情况?
ab shuangmeiqie2014-10-23 16hr 55min_副本.jpg
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

圆yy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励交流! 2014-11-02 22:00:23
Lopick: 金币+1 2014-11-03 08:33:16
1、目测你的酶切好像不完全,多切点时间不急做分子实验
2、凝胶回收注意:低温核酸容易结合在柱子上,所以溶胶液可以冷却在4°冰箱2min,然后离心。
3、高温核酸易分离,所以用60°的洗脱液洗脱,那么你得到的回收率可以达到90%以上
暂时给你这么多意见吧
9楼2014-11-02 21:57:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Lopick: 金币+1 2014-11-02 16:44:17
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-11-02 21:59:54
你可以看一下成像的原理,小片段相对大片段不亮是合理的,你可以增加以下模板的量,因为回收本来就有一定的效率,目的片段太少了,回收过程中损失太多了……
他日扬翼九万里,历大千世界,定我红尘心!
2楼2014-11-02 00:04:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Thomas_T

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Lopick: 金币+2 2014-11-02 16:44:06
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-11-02 22:00:01
小片段回收是比较麻烦,我前段时间也出现过这个问题,首先应该用试剂盒给的TE,因为TE是弱碱性的,有利于DNA的溶解,我前段时间用灭菌水要过一直不好,因为这个水有点偏酸性了。。另外,在最后一步离心下来的DNA溶液再放到柱子上离心一下,这样会提高回收率。当然了,最后加TE的时候最好60度预热一下。
祝你成功~
3楼2014-11-02 09:53:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongdekun

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Lopick: 金币+1 2014-11-02 16:44:11
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-11-02 22:00:06
目测质粒浓度太低,增加酶切质粒的量是最有效的解决办法。。。
另外,我一般回收后都直接测定浓度,不再跑电泳检测的。
4楼2014-11-02 13:07:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿西北工业大学289 085602 +31 yang婷 2026-04-10 31/1550 2026-04-11 00:19 by gong120082
[考研] 材料085601调剂 +25 何润采123 2026-04-10 27/1350 2026-04-10 23:17 by Ftglcn90
[考研] 289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校) +6 白云123456789 2026-04-09 8/400 2026-04-10 21:13 by zhouxiaoyu
[考研] 284求调剂 +19 梵@@ 2026-04-06 21/1050 2026-04-10 21:12 by zhouxiaoyu
[考研] 298求调剂 +13 钉叮咚冬瓜 2026-04-09 13/650 2026-04-10 15:49 by jiajinhpu
[考研] 298求调剂 +8 钉叮咚冬瓜 2026-04-07 10/500 2026-04-10 11:25 by 高维春
[考研] 269求调剂 +10 啊啊我我 2026-04-07 10/500 2026-04-10 10:38 by 高维春
[考研] 293求调剂 +5 勇远库爱314 2026-04-08 5/250 2026-04-10 08:46 by vgtyfty
[考研] 初试分332,一志愿报考西北工业大学, +11 故人?? 2026-04-09 11/550 2026-04-09 21:54 by JineShine
[考研] 调剂 +19 2261744733 2026-04-08 19/950 2026-04-09 19:11 by vgtyfty
[考研] 299求调剂 +6 ZVVZ13 2026-04-08 6/300 2026-04-09 15:48 by wp06
[考研] 265求调剂 +4 风说她早忘了 2026-04-07 4/200 2026-04-09 13:59 by only周
[考研] 求调剂,262机械专硕 +6 嗯yyl 2026-04-08 6/300 2026-04-09 12:01 by zhouyuwinner
[考研] 070300化学学硕311分求调剂 +18 梁富贵险中求 2026-04-04 20/1000 2026-04-09 11:18 by 哒哒哒呱呱呱
[考研] 一志愿华东理工085601材料工程303分求调剂 +15 a1708 2026-04-06 15/750 2026-04-08 16:23 by luoyongfeng
[考研] 求调剂 一志愿西南交通大学085701环境工程 282分 +15 多多爱吃汉堡 2026-04-04 16/800 2026-04-08 11:39 by i_cooler
[考研] 363求调剂 +9 zh096 2026-04-04 9/450 2026-04-07 21:51 by 418490947
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358求调剂 +10 cs0106 2026-04-05 12/600 2026-04-06 19:41 by 无际的草原
[考研] 377求调剂 +6 by.ovo 2026-04-05 6/300 2026-04-05 22:18 by dongzh2009
[考研] 348求调剂 +3 车厘子zzz 2026-04-05 3/150 2026-04-05 20:30 by 啵啵啵0119
信息提示
请填处理意见