| 查看: 4341 | 回复: 34 | ||
fayzhao金虫 (小有名气)
|
[求助]
双酶切后切胶回收
|
|
|
各位虫友好： 目前，我正在做质粒双酶切，体系40ul： dd水 补足40ul 10Xtango buffer 4ul 质粒 2ug kpnI 2ul bglII 2ul 37℃反应5h,电泳检测图如下： 目的是为了回收目的条带（300多bp），切胶回收用了takara的和axygen的，都没有回收到，跑胶没有任何条带。接下来我要做的是将目的基因连接到表达载体中，回收不到怎么办哪？求帮助！！！  2013-1-20双酶切_副本.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有199人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有7人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 各种综合问题：酶切 胶回收 质粒浓缩 测浓度
已经有7人回复
- 目的基因片段胶回收后酶切，然后再跑胶后发现条带很弱，怎么改进（求助）
已经有8人回复
- 空质粒双酶切后大小不对，纠结！
已经有11人回复
- 分步酶切 回收不到片段
已经有4人回复
- 请教PCR产物酶切后是否可以直接过柱纯化而不胶回收？
已经有15人回复
- PET-32a双酶切无法回收
已经有8人回复
- 酶切后未纯化连接出现的问题
已经有18人回复
- 双酶切问题
已经有15人回复
- PCR产物凝胶回收、酶切等问题请教
已经有7人回复
- 有谁试过双酶切的同时加碱性磷酸酶
已经有4人回复
- 表达载体的构建
已经有17人回复
- 求教关于用QIAquick PCR Purification Kit 是否能用来回收双酶切过的pcr产物
已经有3人回复
- 求助 双酶切验证阳性克隆的问题
已经有12人回复
- 双酶切连接表达载体，两个月都没做出来，问题到底出在哪里呢~？求指点
已经有52人回复
- PGEX为何胶回收时只做双酶切？
已经有7人回复
fayzhao
金虫 (小有名气)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 809.6
- 帖子: 97
- 在线: 106.4小时
- 虫号: 1573744
- 注册: 2012-01-11
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2013-01-23 18:54:39
fayzhao
金虫 (小有名气)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 809.6
- 帖子: 97
- 在线: 106.4小时
- 虫号: 1573744
- 注册: 2012-01-11
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
22楼2013-01-26 18:08:25
fayzhao
金虫 (小有名气)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 809.6
- 帖子: 97
- 在线: 106.4小时
- 虫号: 1573744
- 注册: 2012-01-11
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
23楼2013-01-26 18:11:57
转基因猴子
木虫 (正式写手)
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 3791.5
- 散金: 29
- 红花: 4
- 帖子: 784
- 在线: 277.7小时
- 虫号: 450786
- 注册: 2007-11-04
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2013-01-23 17:55:50
fayzhao
金虫 (小有名气)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 809.6
- 帖子: 97
- 在线: 106.4小时
- 虫号: 1573744
- 注册: 2012-01-11
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2013-01-23 18:58:07
raindick1231
铜虫 (小有名气)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 93.3
- 帖子: 83
- 在线: 26.5小时
- 虫号: 649284
- 注册: 2008-11-08
- 性别: GG
- 专业: 植物学研究的新技术、新方
5楼2013-01-23 19:11:01
转基因猴子
木虫 (正式写手)
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 3791.5
- 散金: 29
- 红花: 4
- 帖子: 784
- 在线: 277.7小时
- 虫号: 450786
- 注册: 2007-11-04
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
6楼2013-01-23 19:35:07
酶切专家
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 2
- 应助: 96 (初中生)
- 金币: 1610.8
- 红花: 4
- 帖子: 149
- 在线: 41.3小时
- 虫号: 1648414
- 注册: 2012-02-27
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fayzhao: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-01-24 10:20:46
感谢参与，应助指数 +1
fayzhao: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-01-24 10:20:46
|
一般克隆时，设计一个连接反应，载体需要100ng左右，根据分子数比例（外源片段是载体的3-10倍），事实上，需要的外源片段的绝对量很少（一般不超过50ng). 但考虑到回收的小片段定量的准确性，一般回收到的小片段浓度需要达到10ng/ul。而且再考虑回收时体积最少20ul，而小片段的回收效率一般很难超过50%，因而，回收时小片段的理论量至少是10ng/ul X 20ul X 2 =400ng。由于你的小片段只占你的载体分子的1/10---1/15，因而，你进行酶切时就需要载体至少4--6ug.否则，你很难回收到足够量的小片段进行随后的连接。 为了保证载体的完全酶切，你可能需要利用double digestion disigner精确计算酶切所需要的酶量。 |
7楼2013-01-23 22:12:27
11ychen
铜虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 117.1
- 散金: 255
- 帖子: 96
- 在线: 45小时
- 虫号: 1432831
- 注册: 2011-10-09
- 专业: 生物大分子结构与功能
8楼2013-01-24 10:09:01
9楼2013-01-24 10:14:11
fayzhao
金虫 (小有名气)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 809.6
- 帖子: 97
- 在线: 106.4小时
- 虫号: 1573744
- 注册: 2012-01-11
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
10楼2013-01-24 10:21:32
