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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切后切胶回收
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mascotte

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
fayzhao: 金币+1 2013-02-02 12:20:33
http://www.thermoscientificbio.c ... nzymes/conventional
这个表里面BglII在1Xtango里只有0-20的活性，kpnI 只有20-50的活性，这是fementas公司的网站。
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31楼2013-01-30 19:11:11
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北极星※

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
fayzhao: 金币+1 2013-02-02 12:20:28
可以尝试调整为小体系多管做然后再合并一起胶回收，并且在做酶切前先检测下所使用的DNA浓度如何。对于回收后浓度较低图，即使浓度低也会尝试连接。祝顺利
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32楼2013-01-30 20:10:16
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fayzhao

金虫 (小有名气)
引用回帖:
31楼: Originally posted by mascotte at 2013-01-30 19:11:11
http://www.thermoscientificbio.com/restriction-and-modifying-enzymes/restriction-enzymes/conventional
这个表里面BglII在1Xtango里只有0-20的活性，kpnI 只有20-50的活性，这是fementas公司的网站。...

这个我知道，但是实验数据确实是1Xtango里面比较好……
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33楼2013-02-02 12:21:14
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shine372

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


首先酶切的质粒量要加大，以保证足够的目的片段浓度，这一点大家都提到了，其次，你的目的条带只有300bp，那么你的胶浓度要大点，这样你的目的蛋白条带不会很散，更利于切胶，第三，溶胶后上柱子时，离心的速度降低至3000-4000rpm，速度低时，更利于目的片段与膜的结合。
祝实验顺利！
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34楼2013-02-02 17:42:51
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borntowin27

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

HI，告诉你一个应该有用的办法，如果你现在酶切的克隆质粒的抗性和表达质粒的抗性不同的话，可以以这样做，根本不用割胶回收的，因为这样的小片段经常是酶切后很淡的;
首先，还是将你现在的质粒用这两种没酶切，酶切后不用割胶，直接过柱子回收；
其次，将你的表达载体也用这两种酶进行酶切，酶切后割胶回收，减少最后连接的空载，如果空载有蓝白斑赛选的话，也可以直接过柱子；
最后连接挑斑，因为两个载体的抗性不同，所以不用我在说了吧，哈哈
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35楼2013-02-05 13:30:41
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