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[交流] 如何做分步双酶切已有6人参与

第一个酶切完跑胶回收？那岂不是浓度会很降低？不跑胶回收的话，热失活完直接加第二种酶？那与之对应的buffer怎么加呢？请赐教！！！！越详细越好！！！！

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1楼 2013-09-10 21:09:02

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xiaopeiliang

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第一个酶切完之后，用酚和氯仿抽提；
醇沉
风干后再第二个酶切

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2楼2013-09-10 22:32:09

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ykluuniu

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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-09-11 11:48:26

1.明确你酶切的是什么。载体？还是PCR产物？
载体:酚/氯仿抽提或核酸纯化试剂盒回收，这样回收效率应该比胶回收高。然后再进行下一步单酶切，纯化试剂盒或胶回收。
PCR产物:跑胶，若无二聚体，核酸纯化试剂盒回收比较好，当然，无论有无二聚体，胶回收肯定都没有问题。然后，分步单酶切与载体相同操作，酚/氯仿或试剂盒。纯化试剂盒一定要注意，要弄清楚能回收多大的片段。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

[ Last edited by ykluuniu on 2013-9-10 at 22:56 ]

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3楼2013-09-10 22:54:49

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