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如何做分步双酶切 已有6人参与
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| 第一个酶切完跑胶回收？那岂不是浓度会很降低？不跑胶回收的话，热失活完直接加第二种酶？那与之对应的buffer怎么加呢？请赐教！！！！越详细越好！！！！ |
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4楼2013-09-11 08:25:26
xiaopeiliang
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- 专业: 食品科学基础
2楼2013-09-10 22:32:09
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-09-11 11:48:26
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-09-11 11:48:26
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1.明确你酶切的是什么。载体？还是PCR产物？ 载体:酚/氯仿抽提或核酸纯化试剂盒回收，这样回收效率应该比胶回收高。然后再进行下一步单酶切，纯化试剂盒或胶回收。 PCR产物:跑胶，若无二聚体，核酸纯化试剂盒回收比较好，当然，无论有无二聚体，胶回收肯定都没有问题。然后，分步单酶切与载体相同操作，酚/氯仿或试剂盒。纯化试剂盒一定要注意，要弄清楚能回收多大的片段。 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] [ Last edited by ykluuniu on 2013-9-10 at 22:56 ] |
3楼2013-09-10 22:54:49
5楼2014-10-06 15:20:34