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Lopick

新虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切得到的500bp的片段回收效果不好,是怎么个情况? 已有6人参与

我的质粒全长3000多bp   双酶切后得到2000bp和500bp两个片段  可是前者亮度较好  后者亮度较浅    要回收500bp  可是回收后跑胶没条带   请问各位大神  这是神马情况啊???

双酶切得到的500bp的片段回收效果不好,是怎么个情况?
ab shuangmeiqie2014-10-23 16hr 55min_副本.jpg
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dongdekun

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Lopick: 金币+1 2014-11-02 16:44:11
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-11-02 22:00:06
目测质粒浓度太低,增加酶切质粒的量是最有效的解决办法。。。
另外,我一般回收后都直接测定浓度,不再跑电泳检测的。
4楼2014-11-02 13:07:34
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查看全部 9 个回答

wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Lopick: 金币+1 2014-11-02 16:44:17
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-11-02 21:59:54
你可以看一下成像的原理,小片段相对大片段不亮是合理的,你可以增加以下模板的量,因为回收本来就有一定的效率,目的片段太少了,回收过程中损失太多了……
他日扬翼九万里,历大千世界,定我红尘心!
2楼2014-11-02 00:04:06
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Thomas_T

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Lopick: 金币+2 2014-11-02 16:44:06
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-11-02 22:00:01
小片段回收是比较麻烦,我前段时间也出现过这个问题,首先应该用试剂盒给的TE,因为TE是弱碱性的,有利于DNA的溶解,我前段时间用灭菌水要过一直不好,因为这个水有点偏酸性了。。另外,在最后一步离心下来的DNA溶液再放到柱子上离心一下,这样会提高回收率。当然了,最后加TE的时候最好60度预热一下。
祝你成功~
3楼2014-11-02 09:53:16
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myheat

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
只要有就可以往下做,不必在意量。大不了下步连接全部加上

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-11-02 16:40:58
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